痢疾桿菌福氏2a 2457T的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、痢疾困擾人類多年，但迄今沒有很好的疫苗，主要是因?yàn)閷λ闹虏C(jī)理了解不夠，擴(kuò)展痢疾的生物學(xué)基礎(chǔ)的研究必將對疫苗研究提供新思路。隨著微生物基因組測序工作的迅速展開，痢疾桿菌福氏2a2457T和301的全基因組序列現(xiàn)在已經(jīng)完成測定，并且痢疾桿菌福氏2a2457T的蛋白質(zhì)表達(dá)譜也已經(jīng)建立，這為我們進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是在整體水平研究蛋白質(zhì)表達(dá)與功能，其特點(diǎn)是高通量、獲得的信息量大。我們選擇普遍用于痢疾桿菌遺傳學(xué)與

2、病原學(xué)研究的2457T進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，積累痢疾桿菌的基礎(chǔ)知識并希望能為新疫苗研制找到新的思路。 首先是分別制備2457T全細(xì)胞蛋白與培養(yǎng)液上清中的胞外蛋白，然后通過雙向電泳分離、從電泳凝膠上切取蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切、MALDI-TOF質(zhì)譜檢測肽質(zhì)量指紋圖譜，最后用Mascot軟件在相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫中搜索與之匹配的蛋白質(zhì)。本論文研究內(nèi)容共分兩個(gè)部分，第一部分是驅(qū)除痢疾桿菌福氏2a2457T的侵襲大質(zhì)粒pINV構(gòu)建新菌株2457T/

3、inc并研究其蛋白質(zhì)組變化；第二部分是研究冷熱休克處理和酸處理對痢疾桿菌福氏2a2457T蛋白質(zhì)組的影響。我們在這兩部分研究中總共發(fā)現(xiàn)了45個(gè)差異蛋白質(zhì)，其中第一部分有17個(gè)差異蛋白質(zhì)，第二部分有28個(gè)差異蛋白質(zhì)。 在驅(qū)除大質(zhì)粒的的研究中，我們發(fā)現(xiàn)在總共17個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn)中，幾乎所有上調(diào)的蛋白質(zhì)都是與核酸的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的，β-內(nèi)酰胺酶除外(它的表達(dá)量上調(diào)是構(gòu)建2457T/inc菌株時(shí)所引入的小質(zhì)粒表達(dá)造成的)。這個(gè)現(xiàn)象向我們提