DNA復制起始蛋白在口腔鱗癌中的表達研究.pdf

1、口腔癌鱗狀上皮較正常鱗狀上皮具有較高的增殖活性，而早期診斷很重要。DNA復制起始蛋白與細胞的增殖有關，它們的過量表達與細胞的異常增生和惡性轉變有著密切的聯(lián)系。我們研究的目的是確定這些蛋白能否作為口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程的標志物，為口腔癌的早期診斷和預后提供有價值的信息。我們針對石蠟切片、口腔脫落細胞和小鼠組織分別采用了熒光定量PCR和免疫組化的方法，分別從mRNA和蛋白的水平對目標基因的差異表達做出判斷，運用統(tǒng)計學方法對結果進行分析。本文還

2、通過建立小鼠舌鱗狀上皮癌癥的動物模型，研究在癌變過程中DNA復制起始蛋白的變化情況。 在石蠟切片組織中，從輕度不典型增生到鱗癌，DNA復制起始蛋白的mRNA表達水平呈上升趨勢。CDC6和CDC45的表達與不典型增生和淋巴結轉移有關。CDT1在重度不典型增生樣本中的表達高于輕度和中度不典型增生樣本。MCM2的表達與不典型增生、淋巴結轉移和病理分級有關。DNA復制起始蛋白的表達與腫瘤大小和組織分級無關。線性回歸分析，在臨床分類和DN

3、A復制起始蛋白的表達存在相關性。另外在CDC6和CDT1，MCM2和CDC45之間存在表達偶聯(lián)。非參數(shù)分析顯示MCM2和CDC45比CDC6和CDT1更具有準確性。口腔脫落細胞表達分析的結果表明，利用DNA復制起始蛋白可以有效地將正常人與患口腔癌的病人區(qū)別開來，MCM2和CDC6在癌前病變階段的表達均顯著低于癌變階段脫落細胞中相應基因的表達，可作為癌前的標志物。癌癥術后階段除CDC6外。其它三個蛋白在術后表達趨于正常，與癌變階段有顯著差

4、異，可以作為預后的標志物。小鼠舌上皮組織中，CDC6蛋白在正常上皮中幾乎沒有表達，而在輕、中、重度不典型增生到鱗癌發(fā)展過程中，表達呈上調趨勢，且各組陽性標記指數(shù)之間有顯著性差異(p<0.05)。MCM7在不典型增生和癌變階段的表達陽性率顯著高于正常組織，癌變組表達陽性指數(shù)顯著高于癌前病變組(p<0.01)。 DNA復制起始蛋白可以有效地將舌癌前病變與癌區(qū)別開來，因而可作為舌癌早期診斷的腫瘤標志物。以4NQO建立的小鼠舌癌模型發(fā)病

5、率高，具有典型的人舌癌病理特征。是研究人口腔病變的良好的模型，另外MCM7和CDC6的表達符合在人類標本中的檢測結果。 另外，為了對高等真核生物復制起始機制有更為清楚的認識，我們在釀酒酵母中采用顏色和表型變化進行新的DNA復制起始蛋白的篩選和鑒定。在釀酒酵母中篩選和鑒定了一個Cdc28-C1b復合物的抑制基因Sic1。sic1在第561位堿基發(fā)生G到A的突變，產生了提前終止密碼子，使之后的97個氨基酸功能缺失，產生DNA復制起始