腸外致病性大腸桿菌icmF基因功能研究和侵入腦微血管內(nèi)皮細胞相關基因的篩選.pdf

1、腸外致病性大腸桿菌是一類在特定情況下能引起宿主腸道以外組織感染的病原菌，主要引發(fā)肺部感染、泌尿系統(tǒng)感染和腦膜炎等。盡管已經(jīng)有很多毒力因子被報道參與了上述致病過程，但仍有許多細節(jié)未得到清楚的解釋。細菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)已被鑒定存在于包括腸外致病性大腸桿菌在內(nèi)的多種致病菌中，在細菌致病過程中起到重要作用。本課題利用實驗室前期構(gòu)建的大腸桿菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)基因缺失株△hcp1-3和新構(gòu)建的icmF基因缺失株△icmF，研究icmF基因在豬腸外致病性大腸

2、桿菌PCN033中的作用。
　　主要取得以下結(jié)果:
　　(1)成功利用正反篩選系統(tǒng)構(gòu)建了icmF基因敲除突變株，并改進了突變株的篩選方法。
　　(2)表型實驗結(jié)果顯示，T6SS相關基因缺失并不影響細菌的生長、運動和抗藥能力，但能顯著增強細菌形成生物被膜的能力。
　　(3)細胞實驗結(jié)果顯示，T6SS功能的缺失導致細菌粘附、侵入上皮細胞能力增強。另外，T6SS功能的缺失并不影響細菌對巨噬細胞的毒性，但極顯著的降低了細

3、菌抵抗巨噬細胞吞噬和在巨噬細胞內(nèi)存活的能力。在所有的表型檢測中，△icmF和△hcp1-3的表現(xiàn)基本相同，可以初步認為icmF基因功能與T6SS緊密相關。
　　為了進一步了解致腦膜炎大腸桿菌的致病機制，本研究進一步構(gòu)建了腦膜炎模式菌株RS218的Tn5轉(zhuǎn)座子突變體庫。以人腦微血管內(nèi)皮細胞為模型，篩選侵入能力缺陷的突變株。通過對764株突變株的篩選，初步獲得33株侵入能力明顯下降的突變株。進一步通過檢測候選突變株的生長速率，篩選掉2