部分iFox-Hunting突變體的表型鑒定及功能初步分析.pdf

1、葉片是植物最主要的組成部分，是其于外界溝通的“門戶”。葉片的數(shù)量多少、葉片面積大小、葉片的形態(tài)差異、衰老速度的快慢等對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量、品質(zhì)均具有不同程度的影響。前期，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了一個(gè)可誘導(dǎo)表達(dá)油菜基因的擬南芥功能獲得型突變體庫(kù)，并從中篩選獲得了具有早衰和窄葉表型的突變體。這些突變體的獲得，為培育油菜早熟新品種和新型的具合理葉形的新型油菜新品種提供了重要可能。本研究將在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步將可在擬南芥中引起早衰表型的基因Bn1327以農(nóng)

2、桿菌為介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化油菜，以證明超量表達(dá)相同的油菜基因是否可使擬南芥和油菜產(chǎn)生相同的表型，以此來(lái)證明前期所構(gòu)建的擬南芥突變體庫(kù)，是否可用于研究油菜的功能基因組學(xué)。此外，本研究還對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)突變體rsl-1181的表型特征及相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行了初步分析，主要結(jié)果如下:
　　1、Bn1327轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株的獲得。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的油菜下胚軸遺傳轉(zhuǎn)化體系，把Bn1327基因轉(zhuǎn)入冬性甘藍(lán)型油菜甲W76-1中，得到了T0代陽(yáng)性植株5株，經(jīng)套袋自交

3、后得T1代群體。
　　2、為明確超量表達(dá)Bn1327基因?qū)τ筒嗽缢バ缘挠绊?，我們?duì)田間3個(gè)月苗齡的T1代轉(zhuǎn)基因與對(duì)照植株具相同葉齡的葉片進(jìn)行摘取并進(jìn)行了黑暗處理，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因葉片與對(duì)照葉片相比，葉片衰老速度明顯加快;分子證據(jù)表明，轉(zhuǎn)基因葉片內(nèi)外源基因Bn1327的表達(dá)量也明顯升高。這一研究結(jié)果說(shuō)明，在油菜和擬南芥中超量表達(dá)相同的油菜基因可以引起基本一致的表型，說(shuō)明前期構(gòu)建的擬南芥功能獲得性突變體庫(kù)應(yīng)該適合用于油菜功能基因組學(xué)的研

4、究。
　　3、用誘導(dǎo)劑對(duì)突變體rsl-1181處理14天后，發(fā)現(xiàn)該突變體的葉片由橢圓形變成窄長(zhǎng)型，在第8周時(shí)窄葉表型趨于穩(wěn)定，rsl-1181的葉長(zhǎng)、葉面積均顯著小于野生型，而葉寬則極顯著小于野生型。此外，表型統(tǒng)計(jì)結(jié)果還表明，經(jīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后，與對(duì)照相比，突變體rsl-1181的主要生育期均有不同程度的推遲。
　　4、為了進(jìn)一步解析Bn1181基因調(diào)控葉形的分子機(jī)制，我們參考了Dubois等人提出的窄葉形成模式，并采用q-PC