老年短暫性腦缺血發(fā)作PAC-1、CD62P和頸動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系.pdf

1、在正常人體循環(huán)系統(tǒng)中，血液中的血小板都是未激活，多數(shù)處于靜息狀態(tài)的水平。血小板發(fā)生活化是靜息狀態(tài)下的血小板在受到各種物理、化學(xué)或生物因子的作用下，使得血小板受到刺激而被激活成為活化的血小板。只有靜息狀態(tài)下的血小板發(fā)生活化后，血小板才能發(fā)生粘附、變形、聚集、釋放等一系列的生理過程，形成斑塊，最終導(dǎo)致血栓的形成。血小板糖蛋白的種類較多，其中最主要的糖蛋白是PAC-1和CD62P兩種。上述兩種糖蛋白的生理作用分別是，PAC-1是纖維蛋白原受體

2、，它主要是參與纖維蛋白原的結(jié)合，促使血小板產(chǎn)生聚集反應(yīng)。CD62P則是通過介導(dǎo)血液中的細(xì)胞與細(xì)胞之間(如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞與血小板或內(nèi)皮細(xì)胞)發(fā)生相互的粘附、聚集的過程，以上兩種糖蛋白在形成血栓和血液細(xì)胞之間的炎癥反應(yīng)中起到重要的作用。當(dāng)血小板發(fā)生活化后，血小板糖蛋白表面的CD62P、PAC-1表達(dá)能力比原來明顯增強(qiáng)，并且成為血小板活化的標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)通過流式細(xì)胞術(shù)來檢測(cè)血小板膜上的CD62P、PAC-1的陽性表達(dá)率，我們可以了解到血

3、小板活化的程度。
　　 目的：通過檢測(cè)老年TIA患者的PAC-1、CD62P活化水平進(jìn)行分析和研究，同時(shí)行頸動(dòng)脈血管彩超檢查，分別來觀察老年TIA患者血小板活化程度的變化及伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化各項(xiàng)指標(biāo)的變化。進(jìn)一步分析老年TIA患者活化的血小板水平伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病中的作用，并且通過實(shí)驗(yàn)再次證實(shí)血小板活化標(biāo)志物CD62P、PAC-1的表達(dá)情況，并與健康對(duì)照組比較，明確老年TIA伴頸動(dòng)脈粥樣硬化與血小板活化之間的關(guān)系，為預(yù)防TI

4、A的發(fā)生及再發(fā)、干預(yù)TIA病程進(jìn)展尋找新的方法。
　　 方法：⑴與泰安市中心醫(yī)院查體中心合作，系2010年度泰安市老干部健康查體信息資料中，從中選取正常體檢者50例。男性32例，女性18例，平均年齡為65.4±6.9歲。來用于檢測(cè)血小板活化蛋白CD62P和PAC-1活化程度，并作為實(shí)驗(yàn)中老年TIA組的健康對(duì)照組。健康對(duì)照組中，正常體檢者均要求排除既往患有心、腦血管疾病，呼吸、消化系統(tǒng)疾病，泌尿系統(tǒng)疾病、高血壓病，糖尿病，慢性感染

5、，腫瘤疾病，風(fēng)濕免疫性疾病，近期手術(shù)、活動(dòng)性出血及有出血傾向等疾病病史的查體者。并給予常規(guī)輔助檢查項(xiàng)目，如血常規(guī)，肝、腎功，血脂，血糖，凝血系統(tǒng)，大、小便常規(guī)，心電圖，胸片等檢查結(jié)果均未見明顯異常。⑵老年TIA患者入院后，采集血標(biāo)本時(shí)必須使用一次性采血針，每次抽取靜脈血均要求一針見血。所有受試者次日晨起后空腹，選擇穿刺肘正中靜脈，抽取靜脈血約2ml，為防止血小板發(fā)生活化，抽血時(shí)不予扎止血帶。為防止血液凝固，影響實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果，把血標(biāo)本置于

6、抗凝真空采血管中，血液與抗凝劑的比例為9:1，為使血液與抗凝劑充分混勻，輕輕搖晃采血管。在抽完血標(biāo)本10分鐘內(nèi)必須完成實(shí)驗(yàn)室染色等操作步驟。⑶利用SAS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。各組組內(nèi)的數(shù)據(jù)均采用方差分析。老年TIA組患者與血小板活化水平之間的相關(guān)性分析，應(yīng)用pearson相關(guān)系數(shù)分析數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異，P>0.01認(rèn)為有非常顯著性差異。伴CA的老年TIA組

7、、不伴CA的老年TIA組、伴CA的對(duì)照組和不伴CA的對(duì)照組，這四組的PAC-1、CD62P的陽性率均數(shù)比較，利用F+q檢驗(yàn)。PAC-1、CD62P的陽性表達(dá)率與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊以及斑塊的性質(zhì)關(guān)系的比較均采用t檢驗(yàn)。PAC-1、CD62P的陽性表達(dá)率與受試者的年齡、性別、血小板計(jì)數(shù)、血壓之間有無關(guān)系，采用偏相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：①老年TIA組PAC-1、CD62P陽性表達(dá)率較正常對(duì)照組明顯增高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

8、0.01)。②老年TIA組中伴有或不伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化的TIA患者，其PAC-1、CD62P陽性表達(dá)率顯著高于相應(yīng)的對(duì)照組；兩組比較之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。③在老年TIA組或健康對(duì)照組中，伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化PAC-1、CD62P陽性表達(dá)率明顯高于無頸動(dòng)脈粥樣硬化組，并且以伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化的老年TIA組最高。兩組比較之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。④在伴有頸動(dòng)脈粥樣硬化的老年TIA組中，有粥樣斑塊組的PAC-1、

9、CD62P陽性率明顯高于無粥樣斑塊組。兩組比較之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。⑤伴有頸動(dòng)脈粥樣斑塊的老年TIA組中，伴有不穩(wěn)定斑塊TIA組的PAC-1、CD62P陽性表達(dá)率明顯高于穩(wěn)定斑塊組。兩組比較之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)研究中，為進(jìn)一步明確老年TIA患者與血小板膜糖蛋白之間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采取PAC-1和CD62P作為檢測(cè)血小板活化程度的標(biāo)志物。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在老年TIA組中P

10、AC-1和CD62P的水平比正常相應(yīng)對(duì)照組的陽性表達(dá)率明顯升高。在老年TIA組中，PAC-1和CD62P的水平隨頸動(dòng)脈內(nèi)膜病變程度的加重而逐漸升高。這表明，老年TIA患者中必然存在著血小板活化，而且PAC-1和CD62P的水平隨頸動(dòng)脈受損程度的加重而升高?？紤]可能有兩個(gè)原因，一是患者發(fā)生頸動(dòng)脈粥樣硬化后，血管內(nèi)皮受到不同程度的損傷，導(dǎo)致其中的膠原組織及凝血酶等物質(zhì)的大量產(chǎn)生，促使血小板本身的形態(tài)及結(jié)構(gòu)都發(fā)生了改變，再以鈣離子的形式同細(xì)胞

11、內(nèi)的磷酸化發(fā)生反應(yīng)。二是頸動(dòng)脈粥樣斑塊大量黏貼在血管的管壁上，通過長(zhǎng)時(shí)間的聚集，最終形成大小不一的團(tuán)塊，可造成血管局部官腔內(nèi)的狹窄，使得血液流動(dòng)受阻，血流速度減慢以及流動(dòng)形態(tài)發(fā)生改變，此時(shí)血流速度受到的剪切力明顯高于正常生理水平。所以，高剪切力的作用也可以讓血小板膜表面的PAC-1和CD62P的表達(dá)水平發(fā)揮出更大的作用。通過本研究還發(fā)現(xiàn)，血小板活化程度的高低與頸動(dòng)脈粥樣斑塊的性質(zhì)也有一定的相關(guān)性。老年TIA伴有不穩(wěn)定斑塊組與穩(wěn)定斑塊組對(duì)

12、比較，明顯可以發(fā)現(xiàn)伴有不穩(wěn)定斑塊組的PAC-1和CD62P表達(dá)明顯高于穩(wěn)定斑塊組。其原因可能是因?yàn)槔夏闠IA患者動(dòng)脈血管管壁上的不穩(wěn)定斑塊具有它不穩(wěn)定性的特點(diǎn)，導(dǎo)致斑塊極易發(fā)生脫落，脫落到血管腔內(nèi)，隨血液流動(dòng)，而血小板是黏附在不穩(wěn)定斑塊的表面，促進(jìn)血小板活化與PAC-1和CD62P的大量釋放。所謂血栓前的狀態(tài)，可以簡(jiǎn)單理解為就是血液發(fā)生高凝時(shí)的狀態(tài)，它是因?yàn)檠軆?nèi)皮細(xì)胞受損后，血液內(nèi)的血小板和白細(xì)胞被激活，相應(yīng)的凝血因子得到了活化的機(jī)會(huì)