CIDE-3對肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡影響及其相互作用分子在酵母雙雜交系統(tǒng)中的篩選.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）在全球是常見的惡性腫瘤之一，每年約有1000000的新發(fā)病例[1-3]。其發(fā)病率高、病死率高，嚴(yán)重威脅著人類生命健康。
　　研究背景：
　　在肝細(xì)胞中，有許多凋亡相關(guān)因子。有的因子與細(xì)胞膜上死亡受體相結(jié)合調(diào)節(jié)凋亡的外源性途徑，如Fas配體（FasL），腫瘤壞死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）等等；還有一些因子如轉(zhuǎn)化生長因

2、子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）等并不結(jié)合死亡受體，而是通過影響內(nèi)源性凋亡途徑來調(diào)節(jié)凋亡。凋亡的異常與HCC發(fā)生發(fā)展有關(guān)。
　　誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的DFF45樣效應(yīng)因子家族（celldeath-inducingDFF45-likeeffector，CIDE）家族即是近年來發(fā)現(xiàn)的新基因家族。迄今為止，CIDE家族在人類發(fā)現(xiàn)有3個成員：CIDE-A、CIDE-B和CIDE-3，在鼠中也有三種相應(yīng)的存

3、在方式：Cide-a、Cide-b和鼠脂肪特異性基因（adipocyte-specificgene，F(xiàn)sp27）。CIDE家族在結(jié)構(gòu)上包括與DFF（DNAfragmentationfactor，DAN片段化因子）高度同源的CIDE-N結(jié)構(gòu)域，同時還具有CIDE家族保守的CIDE-C結(jié)構(gòu)域，并以此發(fā)揮其家族的凋亡誘導(dǎo)功能。
　　已有研究表明CIDEs在細(xì)胞內(nèi)可以影響細(xì)胞的凋亡和增生而對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起作用。我們既往的實驗表明：CID

4、E-3的表達(dá)在HCC組織和癌周正常肝組織中存在差異，癌周正常組織內(nèi)CIDE-3的表達(dá)高于HCC組織，而且CIDE-3的表達(dá)陽性率隨著HCC細(xì)胞分化的降低而減少。但關(guān)于HCC與CIDE-3的關(guān)系目前知之甚少。
　　研究目的：
　　探討CIDE-3對肝癌細(xì)胞凋亡功能的影響并篩選出在肝細(xì)胞中與之其相互作用分子，這對于完善HCC的病因?qū)W理論，篩選出新的HCC發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)記以及靶向藥開發(fā)都有著重大的意義。
　　研究方法

5、：
　　1、建立CIDE-3高表達(dá)的HCC細(xì)胞株來觀察細(xì)胞增殖和凋亡的變化；
　　2、以CIDE-3為誘餌蛋白，通過酵母雙雜交系統(tǒng)來篩選與之相互作用的因子。
　　研究結(jié)果：
　　1、成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-CIDE-3，通過脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染入肝癌細(xì)胞SMMC-7721。過表達(dá)CIDE-3的細(xì)胞表現(xiàn)出凋亡增加，生長抑制；
　　2、通過酵母雙雜交系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)CIDE-3與肝細(xì)胞cDNA文庫中的26中基因

6、編碼的不同蛋白相互結(jié)合。通過體內(nèi)、體外實驗驗證P53蛋白誘導(dǎo)基因7（p53proteininducinggene7，PIG7）基因也就是人脂多糖誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子-α因子基因（Homosapienslipopolysaccharide-inducedTNF-αfactor,LITAF）與CIDE-3存在相互作用；它們通過CIDE-3的1～145aa與LITAF相結(jié)合；第三，LITAF與CIDE-3共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，會協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。