杉木優(yōu)良無(wú)性系組培快繁及體胚發(fā)生試驗(yàn)研究.pdf

1、杉木是我國(guó)南方主要造林樹(shù)種，本文比較系統(tǒng)地研究了杉木優(yōu)良無(wú)性系組培快繁及體胚發(fā)生技術(shù)。從杉木遺傳測(cè)定林中選擇出36株優(yōu)良個(gè)體進(jìn)行組培快繁技術(shù)研究，在對(duì)36株杉木優(yōu)良個(gè)體進(jìn)行誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，篩選出5個(gè)優(yōu)良無(wú)性系進(jìn)行重點(diǎn)研究，建立了相應(yīng)的組培快繁技術(shù)體系。誘導(dǎo)培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA0.3～0.8mg·L-1+蔗糖3％；繼代增殖培養(yǎng)基：1/2MS+6-BA0.3～0.5mg·L-1+IBA0.1～0.3mg·L-1+蔗糖3％；生

2、根培養(yǎng)基：1/4改良MS+IBA0.5～1.0mg·L-1/NAA0.5～1.0mg·L-1/ABT1＃1.0～1.5mg·L-1+蔗糖1.5％；組培苗移栽基質(zhì)：黃心土90％+細(xì)沙10％。組培苗生根可達(dá)90％，移栽成活率可達(dá)91％。 以杉木優(yōu)良種質(zhì)未成熟合子胚為外植體進(jìn)行體細(xì)胞胚胎發(fā)生研究，借助311-A最優(yōu)同歸設(shè)計(jì)等，探討了影響杉木體細(xì)胞胚胎發(fā)生的多種因素，并進(jìn)行相關(guān)的生理生化分析和細(xì)胞組織學(xué)觀察，以期確立高效、穩(wěn)定的杉木體胚

3、發(fā)生體系。得出如下結(jié)論： (1)外植體的接種方式和貯藏方式均對(duì)杉木愈傷組織的誘導(dǎo)產(chǎn)生明顯的影響，其中在種子頂部切個(gè)小口的接種方式，愈傷組織平均誘導(dǎo)率最高，為46％，且誘導(dǎo)出的愈傷組織體積較大，質(zhì)量較好。冷藏處理(4℃，1個(gè)月)也有利于愈傷組織的誘導(dǎo)。 (2)外植體基因型對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率有顯著影響，其中，Y21×S27基因型愈傷組織的誘導(dǎo)率最高，為39.37％；5034×Y27最低，為10.50％。 (3)愈傷組

4、織的誘導(dǎo)率與外植體的發(fā)育階段關(guān)系密切。6月25日采摘的球果，處于胚胎選擇階段，誘導(dǎo)率最高，為43.33％，其次是7月2日采摘的球果，為35.26％，而7月16日采摘的球果，誘導(dǎo)率只有15.51％。 (4)運(yùn)用311-A最優(yōu)同歸設(shè)計(jì)，分析2,4-D(x1)、6-BA(x2)與KT(x3)三個(gè)主導(dǎo)因子對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響，建立起杉木愈傷組織的誘導(dǎo)率與這三個(gè)因子之間的多項(xiàng)式同歸方程：y=0.0683+1.1711*x1+3.2220

5、*x2+0.9528*x3-0.0213*x1*x1-0.3313*x2*x2*0.0275*x3*x3+0.0240*x1*x3+0.0451*x2*x3(R2=0.9899)。并進(jìn)行主效應(yīng)和互作效應(yīng)分析，得出誘導(dǎo)培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑最佳組合方案是2,4-D24mg·L-1+6-BA4mg·L-1+KT8mg·L-1。 (5)培養(yǎng)基中肌醇的濃度對(duì)愈傷組織的增殖率有極顯著的影響，當(dāng)肌醇濃度從1g·L-1提高到7g·L-1時(shí)，增

6、殖率由130.92％提升到200.93％，但當(dāng)肌醇濃度繼續(xù)加大后，增殖率反而急劇下降到0，愈傷組織易發(fā)生褐變。 (6)不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和濃度對(duì)愈傷組織增殖的影響不同。較低的2,4-D濃度(0.6mg·L-1)，有利于杉木愈傷組織的增殖，增殖率為146.26％，而以相同濃度的NAA代替2,4-D，愈傷組織的增殖率只有97.37％，增殖效果不如前者。 (7)不同基因型、不同發(fā)育階段的未成熟胚中內(nèi)源GA3、IAA以及AB

7、A含量差別很大，整體上這三種內(nèi)源激素含量隨著發(fā)育程度而有所提高，愈傷組織的誘導(dǎo)率與未成熟胚中內(nèi)源ABA和IAA含量呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.77和O.78。 (8)杉木胚性愈傷組織中的可溶性糖、可溶性蛋白含量和抗氧化物酶活性均明顯高于非胚性愈傷組織，培養(yǎng)基中添加NAA(0.6mg·L-1)、ABA(0.5mg·L-1)和提高肌醇濃度(7g·L-1)，均可顯著提高愈傷組織中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，NAA(0.6mg·L-1)