廣西鐵皮石斛良種組培快繁研究.pdf

1、鐵皮石斛是我國傳統(tǒng)名貴藥材，為蘭科石斛屬附生草本植物，民間素有救命仙草之稱，名列“中華九大仙草”之首。鐵皮石斛自然分布于我國秦嶺以南各省，自然繁殖成活率、生長緩慢，由于過度開采，目前野生資源已瀕臨滅絕，但市場需求量還在不斷上升，進(jìn)行大量人工栽培是解決這一矛盾的唯一途徑。本文以廣西駿捷生物科技有限公司多年篩選的廣西鐵皮石斛良種為材料進(jìn)行組培研究，力求建立利于廣西鐵皮石斛的擴(kuò)繁體系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下（未標(biāo)明品系名稱的均為桂林品系）:
　　

2、1、鐵皮石斛種子以MS+NAA0.5mg/L+20％土豆汁培養(yǎng)基能誘導(dǎo)出高品質(zhì)原球莖，原球莖的生長情況主要受播種密度影響。莖段誘導(dǎo)原球莖時(shí)，1/2MS+NAA0.05 mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.1mg/L+LH1.0g/L（水解乳蛋白）最有利，原球莖誘導(dǎo)率為31.8％。提高KT和LH的用量以及添加2，4-D后，莖段新生芽多數(shù)莖部膨大，但無原球莖誘導(dǎo)成功。
　　2、不同培養(yǎng)基培養(yǎng)原球莖，MS培養(yǎng)基中原球莖的增殖系數(shù)最

3、高，廣西三個(gè)品系均有不同程度分化，MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+20％土豆汁對三個(gè)品系原球莖增殖均適用。
　　3、MS培養(yǎng)基比1/2MS培養(yǎng)基更利于原球莖分化，無玻璃化現(xiàn)象;在MS培養(yǎng)基中單獨(dú)附加NAA誘導(dǎo)原球莖分化，濃度為0.2mg/L時(shí)分化狀態(tài)最佳;NAA濃度不變，改變6-BA濃度誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)中，6-BA濃度為0.3mg/L時(shí)最利于原球莖分化;添加高濃度KT不利于原球莖分化，其濃度應(yīng)低于0.1mg/L更

4、佳。最利于原球莖分化的培養(yǎng)基為MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.1 mg/L，分化率為100％。
　　4、利用不同基本培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗，MS培養(yǎng)基中組培苗生長狀態(tài)優(yōu)于其他培養(yǎng)基。在MS培養(yǎng)基中單獨(dú)附加NAA壯苗，不同品系生長情況不同，桂林品系在附加0.5mg/L的培養(yǎng)基中生長最好，組培苗嫩綠;白石山品系在附加0.3mg/L的培養(yǎng)基中生長狀態(tài)最佳;容縣品系在附加1.0mg/L的培養(yǎng)基中生長最迅速，說明不同品系

5、鐵皮石斛對生長素需求也不同;NAA與6-BA配合壯苗的實(shí)驗(yàn)中，綜合三個(gè)品系的壯苗結(jié)果，培養(yǎng)基MS+NAA0.5 mg/L+6-BA0.5mg/L+20％土豆汁比較適用于三個(gè)品系壯苗，說明復(fù)合激素對鐵皮石斛壯苗更有利。NAA與KT配合壯苗時(shí)組培苗均有不同程度褐化現(xiàn)象，比較來看，KT0.2mg/L配合不同濃度NAA的培養(yǎng)基組培苗更壯，生長也更迅速。在NAA、6-BA和KT三者共同壯苗時(shí)發(fā)現(xiàn)MS+NAA0.3 mg/L+6-BA0.5mg/L

6、+KT0.2mg/L+20％土豆汁壯苗效果最佳。培養(yǎng)基中添加0.5g/L活性炭可以有效防止褐化，1.5g/L活性炭能促進(jìn)組培苗生長。
　　5、適宜莖段誘導(dǎo)叢芽增殖的基本培養(yǎng)基為3/4MS，且新芽生長速度快，最利于莖段誘導(dǎo)叢芽。利用6-BA1.0mg/L與不同濃度NAA誘導(dǎo)叢芽，叢芽誘導(dǎo)率較低，在NAA濃度為0.4mg/L時(shí)增殖系數(shù)最大。KT0.1 mg/L與不同濃度6-BA誘導(dǎo)叢芽時(shí)，6-BA濃度為0.3～0.4mg/L范圍內(nèi)叢芽

7、增殖系數(shù)最高，說明6-BA在一定范圍內(nèi)對鐵皮石斛莖段誘導(dǎo)叢芽有利。不同濃度KT與0.4mg/L的6-BA誘導(dǎo)叢芽，當(dāng)KT濃度達(dá)到0.8mg/L時(shí)叢芽誘導(dǎo)值最高。從本文結(jié)果來看，最利于莖段誘導(dǎo)叢芽的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.3～0.4mg/L+KT0.1mg/L+LH1.0g/L，帶芽莖段誘導(dǎo)叢芽效果比頂芽好，且莖段存活率較高，接種時(shí)把葉片去除且將莖段豎直插入培養(yǎng)基更利于叢芽萌發(fā)。
　　6、單獨(dú)使用NAA誘導(dǎo)生根效果差，NAA與IB

8、A配合生根可使根系粗壯，添加濃度高于0.1mg/L的6-BA后生根質(zhì)量下降，本文利于廣西鐵皮石斛的培養(yǎng)基為MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+20％土豆汁或者M(jìn)S+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+6-BA0.1 mg/L+20％土豆汁，誘導(dǎo)新根數(shù)平均超過3根，根系粗壯，生根效果好。
　　7、廣西3個(gè)品系鐵皮石斛多糖含量的測定結(jié)果顯示:桂林鐵皮石斛多糖含量最高，為32.16％，其甘露糖含量也最多，為25.6