RNAi抑制大鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞MHC-Ⅱ表達(dá)的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用RNAi技術(shù)探討靶向主要組織相容性復(fù)合物(MHC)Ⅱ類抗原反式轉(zhuǎn)錄激活因子(CⅡTA)的shRNA質(zhì)粒載體抑制大鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞(DC)表面MHC-Ⅱ類抗原表達(dá)的可行性。 方法：采用培養(yǎng)基選擇方法體外培養(yǎng)大鼠骨髓源DC；流式細(xì)胞儀檢測DC表面抗原MHC-Ⅱ、OX-62表達(dá)情況；經(jīng)體外設(shè)計合成針對CⅡTA mKNA序列特異性CⅡTA shRNA3條，并分別構(gòu)建于Pgenesil-l質(zhì)粒，提取重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定并測序；

2、在陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染DC；熒光實時定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后CⅡTA、MHC-Ⅱ mRNA表達(dá)水平的變化，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原MHC-Ⅱ表達(dá)水平的變化；使用SPSS 13.0 for Windows進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)論：培養(yǎng)基選擇法可收獲大量骨髓源DC，形態(tài)典型，高表達(dá)MHC-Ⅱ和OX-62分子；脂質(zhì)體Lipofectamine 2000介導(dǎo)CⅡTA shRNA質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染大鼠骨髓DC，轉(zhuǎn)染效率較高，可高效、特異地抑制自身的