小鼠急性肺損傷時(shí)期促炎癥消退介質(zhì)脂氧素的變化及調(diào)節(jié)機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：小鼠脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷自我消退模型的建立及內(nèi)源性脂氧素表達(dá)的研究
　　目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)氣管內(nèi)滴注誘導(dǎo)急性肺損傷的變化規(guī)律以及脂氧素A4及其合成途徑中5-脂加氧酶的表達(dá),以探討脂氧素A4在急性肺損傷期間的作用,以及5-脂加氧酶的變化規(guī)律。
　　方法:雄性BALB/c小鼠6-8周,體重20-25g,隨機(jī)將將動(dòng)物分成3組:(1)零點(diǎn)組(Zero point,O group

2、):得到小鼠后即刻處理;(2)對照組(Control group,C):采用生理鹽水氣管內(nèi)滴注,按照1.5μl/g給藥;(3)急性肺損傷組(Acute lung injury group,ALI):氣管內(nèi)滴注脂多糖,按照3μg/g劑量滴注。C組和ALI組在給藥后6小時(shí),12小時(shí),1天,2天,4天,7天處理小鼠。光鏡檢測小鼠肺HE染色切片,并進(jìn)行評分;BCA法檢測肺泡灌洗液中蛋白溶度;ELISA法檢測肺泡灌洗液中白介素-1beta(int

3、erleukin-1beta,IL-1β),腫瘤壞死因子-alpha(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和脂氧素A4(LXA4)的濃度;real-time PCR法檢測肺組織中5-脂加氧酶(5-lipoxygenase,5-LO)基因水平的表達(dá)。
　　結(jié)果:氣管內(nèi)滴注3μg/g脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷發(fā)生后:①零點(diǎn)組合對照組肺組織結(jié)構(gòu)沒有明顯變化,急性肺損傷組則出現(xiàn)肺泡毛細(xì)血管充血,肺泡腔內(nèi)炎性細(xì)胞浸

4、潤、肺泡間隔增粗等現(xiàn)象,但隨著時(shí)間推移,這些現(xiàn)象逐漸減輕,在7天時(shí)部分恢復(fù)正常狀態(tài);急性肺損傷評分在一天組中達(dá)到高峰,進(jìn)而下降;②與零點(diǎn)組和對照組比較,急性肺損傷組肺組織濕干重比在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)升高明顯;③與零點(diǎn)組和對照組比較,急性肺損傷組中細(xì)胞總數(shù)在1天時(shí)達(dá)到頂點(diǎn),隨后下降;④與零點(diǎn)組與對照組比較,急性肺損傷組BALF中蛋白含量6小時(shí)到1天組呈上升趨勢,從1天組到7天組呈下降趨勢;⑤與零點(diǎn)組和對照組比較,急性肺損傷組中BALF中TNF-α

5、在1天時(shí)達(dá)到頂點(diǎn),隨后下降;IL-1β在12小時(shí)達(dá)到高峰期,隨后下降;⑥與零點(diǎn)組和對照組比較,急性肺損傷組中BALF中的脂氧素合成在1天和7天時(shí)達(dá)到高峰期,6小時(shí)組到1天組呈上升趨勢,1天組后下降,隨后4天組到7天組呈上升趨勢;⑦與零點(diǎn)組和對照組比較,急性肺損傷組肺組織5-LOmRNA6小時(shí)到1天組呈上升趨勢,隨后下降;4天組到7天組中呈上升趨勢。
　　結(jié)論:氣管內(nèi)滴注脂多糖能成功誘導(dǎo)急性肺損傷的發(fā)生,且5-脂加氧酶在脂氧素合成途

6、徑中起到重要作用。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷此模型急性肺損傷在24小時(shí)左右達(dá)到高峰期,針對此時(shí)期進(jìn)行干預(yù)可能對急性肺損傷的預(yù)后有一定的作用。
　　第二部分：過氧化物酶增殖物激活受體γ激動(dòng)劑羅格列酮預(yù)處理對急性肺損傷時(shí)脂氧素生成的調(diào)控
　　目的:研究過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑羅格列酮對脂多糖(LPS)氣管內(nèi)滴注誘導(dǎo)急性肺損傷的保護(hù)作用,和對內(nèi)源性脂氧素(LXA4)合成以及對脂氧素合成途徑中5-脂加氧酶的表達(dá)變化的影響,

7、以探討過氧化物酶增殖物激活受體γ激動(dòng)劑羅格列酮與脂氧素A4以及5-脂加氧酶的內(nèi)在聯(lián)系。
　　方法:以脂多糖氣管內(nèi)滴注制作急性肺損傷模型,根據(jù)給藥將動(dòng)物分成7組:(1)對照組(Control group,C):采用生理鹽水氣管內(nèi)滴注,按照1.5ml/kg給藥;(2)急性肺損傷組(Acute lung injury group,ALI):氣管內(nèi)滴注脂多糖,按照3mg/kg劑量滴注。(3)羅格列酮溶劑組(LPS+DMSO(1:10)):

8、DMSO溶液(DMSO:NS=1:10,體積比)灌胃三天后,氣管內(nèi)滴注脂多糖3mg/kg;(4)GW9662溶劑組(LPS+DMSO(1:100)):DMSO溶液(DMSO:NS=1:100,體積比),腹腔內(nèi)注射1.5小時(shí)后,給予LPS氣管內(nèi)3mg/kg滴注;(5)羅格列酮預(yù)處理組(ROS+LPS):羅格列酮10mg/kg灌胃給藥3天后,氣管內(nèi)給予LPS3mg/kg滴注;(6)GW9662組(GW9662+LPS):小鼠腹腔內(nèi)給予GW9

9、6621mg/kg,1.5小時(shí)后LPS3mg/kg氣管內(nèi)滴注;(7)羅格列酮+GW9662組(ROS+GW9662+LPS):羅格列酮預(yù)處理3天后,GW9662腹腔內(nèi)注射給藥,1.5小時(shí)后給予LPS氣管內(nèi)滴注刺激。各組在給予LPS24小時(shí)后處理小鼠。光鏡檢測小鼠肺HE染色切片,并進(jìn)行急性肺損傷評分;BCA法檢測肺泡灌洗液中蛋白溶度;ELISA法檢測肺泡灌洗液中白介素-1β(IL-1β),腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和脂氧素A4(LXA

10、4)的濃度;Western blotting檢測肺組織中5-脂加氧酶的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:羅格列酮預(yù)處理減輕了脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷病理學(xué)改變和降低了急性肺損傷評分;羅格列酮預(yù)處理減少了小鼠BALF中的細(xì)胞總數(shù),降低了BALF中蛋白濃度。羅格列酮預(yù)處理還降低了小鼠BALF中TNF-α和IL-1β的濃度,檢測lipoxinA4濃度升高。同時(shí)發(fā)現(xiàn)預(yù)處理后小鼠肺組織中5-LO的表達(dá)增加。
　　結(jié)論:過氧化物酶增殖物激活受體γ

11、激動(dòng)劑羅格列酮預(yù)處理對肺損傷有一定的保護(hù)作用;PPARγ能促進(jìn)肺組織中脂氧素的合成,同時(shí)促進(jìn)5-LO的表達(dá)。
　　第三部分：阿司匹林誘生型脂氧素后處理對急性肺損傷時(shí)期過氧化物酶增殖物受體γ的影響
　　目的:證實(shí)外源性給予阿司匹林誘生型脂氧素(Aspirin-triggered lipoxinA4,ATL)對由內(nèi)毒素引起的小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用,以及對急性肺損傷時(shí)期小鼠體內(nèi)過氧化物酶增殖物受體γ(Peroxisome Pro

12、liferated-Activated Receptor Gamma,PPARγ)活性的影響。以探討脂氧素A4與過氧化物酶增殖物受體γ的相互聯(lián)系。
　　方法:以脂多糖氣管內(nèi)滴注制作急性肺損傷模型,根據(jù)給藥將動(dòng)物分成7組:(1)對照組(Control group,C):采用生理鹽水氣管內(nèi)滴注,按照1.5ml/kg給藥;(2)急性肺損傷組(Acute lung injury group,ALI):氣管內(nèi)滴注脂多糖,按照3mg/kg劑量

13、滴注。(3)GW9662溶劑組(LPS+DMSO):DMSO溶液(DMSO:NS=1:100,體積比),腹腔內(nèi)注射1.5小時(shí)后,給予LPS氣管內(nèi)3mg/kg滴注;(4)ATL溶劑組(LPS+NS):氣管內(nèi)給予脂多糖3mg/kg滴注,1小時(shí)后尾靜脈注射100μl生理鹽水;(5)ATL后處理組(LPS+ATL):LPS3mg/kg氣管內(nèi)滴注,1小時(shí)后尾靜脈按ATL7μg/g注射;(6)GW9662+ATL組(GW9662+LPS+ATL):

14、腹腔內(nèi)注射GW96621.5小時(shí)后氣管內(nèi)給予脂多糖3mgkg滴注,1小時(shí)后尾靜脈按ATL7μg/g注射;各組在給予LPS24小時(shí)后處理小鼠。光鏡檢測小鼠肺組織HE染色切片,并行急性肺損傷評分;BCA法檢測小鼠肺泡灌洗液中蛋白溶度;ELISA法檢測肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)和脂氧素A4(lipoxin

15、A4)的濃度;Western blotting檢測肺組織核蛋白中PPARγ的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:ATL減輕了由LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型的病理學(xué)改變,降低了肺損傷評分;ATL減少了模型BALF中的細(xì)胞總數(shù),降低了濕干重比值;ATL減少了模型BLAF中蛋白含量;ATL減少了細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的濃度;在WB檢測中,ATL增加了肺組織中PPARγ的表達(dá)。
　　結(jié)論:ATL能減輕小鼠急性肺損傷模型的損傷狀態(tài),對肺損