Notch信號(hào)途徑轉(zhuǎn)錄因子RBP-J在小鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)中對(duì)受體T細(xì)胞亞群的影響.pdf

1、目的：
　　1.建立易行可靠的小鼠頸部異位心臟移植模型，改進(jìn)小鼠頸部異位心臟移植模型和手術(shù)方式。
　　2.培育鑒定T細(xì)胞中特異性剔除RBP-J轉(zhuǎn)基因小鼠，通過建立小鼠頸部異位心臟移植模型，探討Notch信號(hào)途徑中轉(zhuǎn)錄因子RBP-J對(duì)小鼠同種異體心臟移植受體T細(xì)胞亞群的影響。
　　方法：
　　1.在顯微鏡下對(duì)受體手術(shù)，游離受體右側(cè)靜外靜脈和頸總動(dòng)脈，對(duì)供體，經(jīng)下腔靜脈注射肝素鈉全身肝素化后，于低溫下切取供心；采用供

2、心無名動(dòng)脈與受體頸總動(dòng)脈端端間斷吻合，供心肺動(dòng)脈與受體頸外靜脈端端吻合，進(jìn)行小鼠頸部異位心臟移植。
　　2.交配Lck-CrexRBP-Jflox/+雜合子轉(zhuǎn)基因小鼠，提取其子代小鼠尾巴DNA,通過凝膠電泳，鑒定小鼠基因型,確定基因敲除小鼠。
　　3.選用三種小鼠，即C57BL/6，Balb/c以及RBP-J基因條件性剔除小鼠，采用頸部異位小鼠心臟移植模型，將32只小鼠按隨機(jī)原則分為2組：A組（n=8）BALB／c→C57B

3、L／6；B組（n=8）BALB／c→RBP-J基因剔除小鼠，移植術(shù)后1、3、5、7天留取移植物，觀察大體情況及組織病理學(xué)變化。
　　4.提取小鼠外周血，行血常規(guī)檢查。獲取受體小鼠胸腺、淋巴結(jié)、脾臟，分離T淋巴細(xì)胞，抗-CD4-PE、抗-CD8-APC和抗-CD25-FITC染色，行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.供心總?cè)毖獣r(shí)間40min,術(shù)后復(fù)跳率90％，改進(jìn)后的術(shù)式手術(shù)成功率有所提高,模型的建立為下一步實(shí)驗(yàn)提供

4、了技術(shù)基礎(chǔ)。
　　2.通過培育繁殖，我們得到轉(zhuǎn)基因小鼠并通過DNAPCR擴(kuò)增，凝膠電泳鑒定轉(zhuǎn)基因小鼠，為下一步實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)材料。
　　3.建立小鼠頸部異位心臟移植術(shù)后，C57小鼠對(duì)照組（n=7）移植術(shù)后移植心平均存活時(shí)間為（6±1.21）d，基因敲除小鼠實(shí)驗(yàn)組移植術(shù)后移植心平均存活時(shí)間為（4±1.8）d，與對(duì)照組相比，存活時(shí)間明顯縮短，（P<0.05）。脾臟細(xì)胞的增加主要是Mac1陽性的細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量的增加（P＜0.01），

5、以及CD8陽性細(xì)胞的增加（P＜0.01）。而淋巴結(jié)的細(xì)胞數(shù)的增加主要是T細(xì)胞（P＜0.01）,尤其是CD8陽性的T細(xì)胞的增加（P＜0.01），以上結(jié)果初步提示RBP-JKO受體小鼠相比control受體小鼠，CD8陽性的T細(xì)胞對(duì)于移植物的反應(yīng)增強(qiáng)。而脾臟中天然發(fā)生的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)也有所降低（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.改進(jìn)后的術(shù)式手術(shù)成功率高，術(shù)中暴露充分、血管處理簡(jiǎn)單、手術(shù)創(chuàng)傷小，污染機(jī)率小等，是簡(jiǎn)單、實(shí)用