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文檔簡介
1、目的：甲型流感病毒核蛋白NP融合基因的構(gòu)建及表達(dá)；檢測特異siRNA在MDCK細(xì)胞中對NP融合基因表達(dá)的抑制作用。
方法：PCR擴(kuò)增甲型流感病毒核蛋白NP基因片段，運(yùn)用三種不同的方法構(gòu)建NP與綠色熒光蛋白的融合基因pEGFP-N1-NP，獲取成功構(gòu)建含綠色熒光蛋白融合基因的方法；利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將融合基因表達(dá)質(zhì)粒載體pEGFP-N1-NP導(dǎo)入MDCK細(xì)胞；設(shè)計(jì)并合成針對甲型流感病毒多種亞型的特異性siRNA，并與融合基因pE
2、GFP-N1-NP共轉(zhuǎn)染MDCK細(xì)胞，通過熒光顯微鏡、免疫熒光、Western blot等方法檢測NP基因的表達(dá)以及siRNA對NP基因表達(dá)的抑制作用，篩選出對NP基因表達(dá)能有效抑制的siRNA。
結(jié)果：通過構(gòu)建甲型流感病毒核蛋白NP融合基因三種方法的比較研究，成功獲取了構(gòu)建含綠色熒光蛋白融合基因的方法；熒光顯微鏡、免疫熒光、Western blot等方法檢測NP基因在MDCK細(xì)胞中的表達(dá)，所設(shè)計(jì)的3對特異siRNA均能有
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