烏司他丁對膿毒癥大鼠腸道黏膜免疫功能的保護作用.pdf

1、膿毒癥(sepsis)已成為現(xiàn)今住院病人最大的健康威脅，每年影響數(shù)百萬人，死亡率在25％以上。業(yè)已證實腸道黏膜免疫功能的減退所導(dǎo)致的腸屏障功能障礙在膿毒癥的發(fā)病中起重要作用。胰蛋白酶抑制劑烏司他丁(ulinastatin，UTI)在多種動物模型和臨床試驗中被發(fā)現(xiàn)其具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用和臟器保護功能，但烏司他丁對腸道黏膜免疫功能的影響如何尚不清楚。 研究目的： 本研究擬建立大鼠膿毒癥模型，檢測烏司他丁干預(yù)后膿毒癥不同階段

2、回腸組織學(xué)觀察、潘氏細胞防御素-5(rat defensin-5，RD-5)和杯狀細胞腸三葉因子(trefoil factor family,TFF3)mRNA的表達、回腸黏膜淋巴細胞凋亡和外周血腸源性細菌移位，研究膿毒癥時腸道黏膜免疫功能的改變及UTI對其的影響，進一步挖掘其應(yīng)用潛力，為臨床膿毒癥的治療提供新的理論依據(jù)。 材料與方法： 1.研究對象 1.1實驗動物 SD大鼠50只(中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物

3、實驗中心提供，編號2006A064)； 1.2實驗藥物 烏司他丁(廣東天普生化醫(yī)藥公司生產(chǎn)，規(guī)格 50，000u/安瓿，粉針劑，藥物批號02070806)。 2.研究方法： 2.1 實驗分組 50只SD大鼠隨機分為對照組(n=5)、預(yù)處理組、治療組及膿毒癥組(n=15)。后三組建立膿毒癥模型，并根據(jù)模型建立后3小時、6小時及12小時再分為3個亞組，每組5只。預(yù)處理組于模型建立前2h尾靜脈給予U

4、TI 25，000u/Kg，治療組于模型建立后2h給予UTI 50，000u/Kg，膿毒癥組不予任何干預(yù)。 2.2模型制作 采取盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture，CLP)制作膿毒癥模型。 2.3檢測指標 2.3.1病理光鏡觀察回腸黏膜改變； 2.3.2 RT-PCR半定量法檢測回腸潘氏細胞RD-5和杯狀細胞TFF3mRNA的表達； 2.3.3 TUNE

5、L法檢測回腸黏膜淋巴細胞的凋亡； 2.3.4 PCR擴增檢測全血腸源性細菌(大腸桿菌)DNA。 2.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理，實驗計量資料均以均數(shù)±標準差(x-±s)表示，兩組間比較用t檢驗，多組間比較用方差分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1.回腸黏膜病理光鏡觀察 對照組腸黏膜結(jié)構(gòu)清晰，腸上皮絨毛完整；烏司他丁預(yù)處理組黏膜腸上皮絨毛輕微脫落

6、，乳糜管擴張；烏司他丁治療組黏膜腸上皮脫落、毛細血管擴張、充血；膿毒癥組腸黏膜腺體結(jié)構(gòu)喪失、腸上皮絨毛脫落、固有層水腫、毛細血管出血和潰瘍形成。 2.回腸潘氏細胞防御素-5(RD-5)及杯狀腸三葉因子(TFF3)mRNA表達 膿毒癥組RD-5及TFF3mRNA表達水平與對照組相比顯著下降；烏司他丁預(yù)處理組和治療組較膿毒癥組相比有顯著改善，其中CLP后12小時亞組預(yù)處理組與治療組比較顯著提高RD-5和TFF3mRNA的表達

7、(PRD-5=0.0369，PTFF3=0.0296)。 3.回腸黏膜淋巴細胞凋亡 膿毒癥組較對照組相比顯著增加(P<0.01)，烏司他丁治療組和預(yù)處理組較膿毒癥組相比凋亡下降(P<0.05)，烏司他丁預(yù)處理組在12小時亞組與治療組相比凋亡下降(P=0.0402)。 4.腸源性細菌移位 大腸桿菌DNA在全部膿毒癥和大部分(73.33％)烏司他丁治療組中呈現(xiàn)陽性，在全部烏司他丁預(yù)處理組和對照組中均呈陰性。(