脂筏—前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子與胰島素通路作用的新視角.pdf

1、目的:前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子(pre-Bcellcolonyenhancingfactor，PBEF)是聯(lián)系炎癥與胰島素抵抗的橋梁，是研究和治療炎癥所致胰島素抵抗的潛在靶點(diǎn)。然而PBEF與胰島素通路是否存在相互作用及其機(jī)制一直存在很大爭(zhēng)議。脂筏作為膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要平臺(tái)，在胰島素信號(hào)通路中發(fā)揮著重要作用。本研究首次從一個(gè)全新的角度——脂筏來探究PBEF與胰島素受體(insulinreceptor，IR)及胰島素信號(hào)通路相互作用的機(jī)制，以期揭

2、示炎癥所致的胰島素抵抗的新機(jī)制。
　　方法:采用去垢劑及非去垢劑法從A549細(xì)胞系中提取脂筏，鑒定PBEF與IRβ在脂筏內(nèi)外的分布。構(gòu)建重組PBEF質(zhì)粒及其突變質(zhì)粒S199，提取PBEF及S199蛋白，研究PBEF對(duì)IRβ在脂筏內(nèi)外分布的影響。運(yùn)用免疫共沉淀(immunoprecipitation，IP)研究PBEF、IRβ與Caveolin-1(Cav-1)的相互作用，及其與Cav-1磷酸化的關(guān)系。采用不同時(shí)間點(diǎn)研究PBEF對(duì)胰

3、島素誘導(dǎo)的Akt活化的影響。
　　結(jié)果:PBEF在脂筏內(nèi)外均有分布，而IRβ在非去垢劑法中僅存在于脂筏。PBEF能誘導(dǎo)IRβ從脂筏轉(zhuǎn)移至非脂筏，NAD也具有類似作用，但該作用不能完全被S199和FK866阻斷。IRβ、PBEF與Cav-1三者相互結(jié)合。PBEF可導(dǎo)致非脂筏中與IRβ結(jié)合的Cav-1磷酸化水平明顯增加。給予胰島素處理5min內(nèi)加入PBEF，Akt的磷酸化水平較胰島素單獨(dú)作用時(shí)降低;而給予胰島素處理5min后再加入PB