蘋果己糖激酶基因MdHXK1的克隆、表達(dá)分析與功能鑒定.pdf

1、本研究以‘嘎拉’蘋果（Malus× domestica Borkh.）為研究材料，通過克隆獲得了蘋果己糖激酶基因MdHXK1，并對其進(jìn)行了生物信息學(xué)和Southern blotting分析，利用qRT-PCR技術(shù)對其在不同組織、生長期和逆境條件下的表達(dá)水平，以及果實(shí)發(fā)育不同時(shí)期內(nèi) MdHXK1葡萄糖磷酸化相對酶活性和葡萄糖積累進(jìn)行了檢測，通過原核誘導(dǎo)獲得了重組蛋白，并獲得了過表達(dá)蘋果己糖激酶基因 MdHXK1的轉(zhuǎn)基因擬南芥株系，旨在為進(jìn)

2、一步深入研究蘋果己糖激酶的功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下：⑴獲得了蘋果己糖激酶基因MdHXK1（基因序列號：MDP0000309677）的全長cDNA，測序發(fā)現(xiàn)其完整的開放閱讀框?yàn)?497 bp，編碼499個(gè)氨基酸；關(guān)鍵基序和氨基酸殘基在 AtHXK1、AtHXK2和MdHXK1序列間十分保守；結(jié)構(gòu)域分析表明，MdHXK1蛋白含有Hexokinase_1和Hexokinase_2兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域；分析 MdHXK1基因啟動子序列發(fā)現(xiàn)其含有與

3、抗逆、糖信號及激素信號相關(guān)的順式作用元件。⑵Southern blotting結(jié)果表明，蘋果基因組中 MdHXK1有一個(gè)拷貝；MdHXK1定位于蘋果基因組的第15號染色體上，具有9個(gè)外顯子；亞細(xì)胞定位預(yù)測結(jié)果表明，蘋果MdHXK1蛋白在大部分亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)均有分布。⑶qRT-PCR結(jié)果顯示，MdHXK1在蘋果的莖和花中表達(dá)量較高；在蘋果果實(shí)發(fā)育期間，MdHXK1基因的表達(dá)、MdHXK1葡萄糖磷酸化相對酶活性和葡萄糖積累水平都呈現(xiàn)先升高后降低