高效毛細管電泳及液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥質(zhì)量控制過程中的應(yīng)用.pdf

1、高效毛細管電泳(HPCE)技術(shù)是一種與高效液相色譜(HPLC)分離機理不同的分離技術(shù)，該技術(shù)具有分離效率高，實驗消耗較少，柱系統(tǒng)易清洗等優(yōu)點，在復(fù)雜樣品的分離分析上可作為液相色譜的一種有力補充。中藥材成分復(fù)雜，分離分析難度較高，本文探索性地采用高效毛細管電泳技術(shù)，對太子參、金銀花、龍膽和蓮子心四種藥材中的有效成分進行分析，為利用該技術(shù)對中藥材進行質(zhì)控的可行性提供了相關(guān)理論和應(yīng)用基礎(chǔ)。本文還采用高效液相色譜．電噴霧飛行時間質(zhì)譜(HPLC-

2、ESI-TOF/MS)聯(lián)用技術(shù)對龍膽和蓮子心有效成分進行了分析，鑒定出了其中的多種化合物。現(xiàn)將本文主要研究結(jié)果歸納如下： 1．建立了測定太子參中環(huán)肽Pseudostellarin B含量的HPCE分析方法，并對10種不同產(chǎn)地太子參中環(huán)肽Pseudostellarin B的含量進行了測定。在此基礎(chǔ)上進行了太子參HPCE指紋圖譜研究，采用中藥指紋圖譜相似度計算軟件對不同太子參樣品的HPCE指紋圖譜進行相似度計算。 2．建立了

3、測定金銀花和山銀花藥材中綠原酸、槲皮素和蘆丁含量的高效毛細管電泳(HPCE)分析方法，并對其進行指紋圖譜研究。采用加速溶劑萃取法(ASE)對藥材進行提取，在選定的HPCE工作條件對金銀花藥材進行了含量測定。并在此基礎(chǔ)上進行了金銀花HPCE指紋圖譜研究，采用中藥指紋圖譜相似度計算軟件對。HPCE指紋圖譜進行相似度計算，以系統(tǒng)生成的對照指紋圖譜為對照模板，同一產(chǎn)地金銀花藥材指紋圖譜相似度均在0.93以上，不同產(chǎn)地金銀花藥材指紋圖譜相似度在0

4、.77-0.98之間不等，且可有效區(qū)分金銀花和山銀花藥材。 3．建立利用大孔吸附樹脂對龍膽藥材中龍膽苦苷和馬錢子甙酸進行富集和分離純化的方法，對D301，AB-8，D101，XDA-1四種大孔樹脂對龍膽苦苷和馬錢子甙酸的吸附性能進行了比較，最終確定采用D301型大孔樹脂對二者進行富集、純化。全程采用HPLC進行龍膽苦苷和馬錢子甙酸濃度監(jiān)測，對該過程中的工藝參數(shù)進行優(yōu)化，龍膽苦苷和馬錢子甙酸分別富集在8％和55％的乙醇洗脫液中，洗

5、脫液濃縮后冷凍干燥，可得到純度分別為74.3％和80.9％的粗產(chǎn)物。 4．建立了膠束電動毛細管色譜(MEKC)和微乳液毛細管電動色譜法(MEEKC)分析龍膽藥材中龍膽苦苷和馬錢子甙酸含量的方法。分別考察了兩種分離模式下電泳介質(zhì)的構(gòu)成和電泳過程中的各操作參數(shù)對樣品分離過程的影響，優(yōu)化了MEKC和MEEKC的分析條件，在各自對應(yīng)的緩沖液體系和選定的工作條件下，龍膽苦苷和馬錢子甙酸與其他組分達到了基線分離，對六處不同產(chǎn)地的龍膽藥材進行

6、了分析，并對測定結(jié)果進行了t檢驗，結(jié)果表明，兩種模式下，測定結(jié)果之間不存在顯著性差異，而不同產(chǎn)地的龍膽藥材的龍膽苦苷和馬錢子甙酸含量之間存在較大差異。 5．建立了采用MEKC，MEEKC及非水毛細管電泳(NACE)三種模式對蓮子心中的的蓮心堿，異蓮心堿和甲基蓮心堿進行定量分析的方法。采用正交實驗設(shè)計方法優(yōu)化了分析條件。結(jié)果表明，三種模式均可用于蓮子心藥材中生物堿含量的測定及其質(zhì)量控制，將其用于實際的提取物分析工作中，方法快捷，結(jié)

7、果可靠。 6．建立HPLC-ESI-TOF/MS聯(lián)用技術(shù)用于中藥材龍膽有效成分含量測定及其指紋圖譜研究的方法。龍膽藥材ASE粗提物通過氯仿萃取分為水溶相和氯仿相，采用HPLC-DAD對龍膽苦苷和馬錢子甙酸進行定量測定，并在此基礎(chǔ)上建立龍膽藥材的HPLC二元特征指紋圖譜，采用HPLC-ESI-TOF/MS對指紋圖譜中的特征峰進行定性。結(jié)合文獻，通過各色譜峰紫外光譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，鑒別出了水溶相中的馬錢子甙酸，阿魏酸，和龍膽苦苷三種化合

8、物，初步判斷氯仿相中的主要組分為三萜類化合物。采用中藥指紋圖譜相似度計算軟件對不同龍膽樣品的指紋圖譜進行相似度計算，同批次藥材指紋圖譜相似度均在0.98以上，表明本文所建立的方法重現(xiàn)性好；6處不同產(chǎn)地藥材水相指紋圖譜相似度均在0.90以上，而氯仿相指紋圖譜相似度在0.62-0.99之間不等，說明不同產(chǎn)地龍膽藥材的質(zhì)量差異主要體現(xiàn)在三萜類化合物上。本方法可用于龍膽藥材有效成分的含量測定及質(zhì)量控制。 7．發(fā)展了HPLC-DAD-ES

9、I-TOF/MS分析蓮子心中生物堿類化合物的方法，在此基礎(chǔ)上，進行了蓮子心藥材的指紋圖譜研究。采用加速溶劑萃取法(ASE)對蓮子心進行提取，采用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS聯(lián)用技術(shù)對其中的化學(xué)成分進行分離鑒定，鑒定了其中的六種生物堿分別為：前荷葉堿，蓮心季銨堿，蓮心堿，異蓮心堿，荷葉堿和甲基蓮心堿。利用指紋圖譜相似度計算軟件對所得指紋圖譜進行分析，產(chǎn)自安徽的12批蓮子心藥材指紋圖譜相似度均在0.．98以上，證明本方法重現(xiàn)性較高