纈沙坦聯(lián)合川芎嗪治療大鼠血管性癡呆的實驗研究.pdf

1、目的：研究纈沙坦聯(lián)合川芎嗪對大鼠VD的治療效果；初步探討纈沙坦聯(lián)合川芎嗪治療大鼠VD的作用機制。 方法：Morris水迷宮篩選學習記憶功能正常的雄性SD大鼠；隨機分組法對大鼠進行分組（假手術組、模型組、纈沙坦組、川芎嗪組和纈沙坦聯(lián)合川芎嗪組）；采用2—VO+硝普鈉降壓法建立大鼠VD模型；每天1次連續(xù)灌胃給藥，共15天；Morris水迷宮測試各組大鼠學習記憶能力；腹主動脈取血，冰上勻漿，1500轉/分轉速離心5分鐘制備血漿及海馬組

2、織勻漿上清液，化學比色法測定海馬組織SOD、iNOS和GSH—Px活性及MDA和NO含量；放射免疫法測定血漿中AngⅡ、AVP、TXB2和6—keto—PGF1α的含量。RT—PCR和瓊脂糖凝膠電泳法測定海馬組織IL—1βmRNA的表達；4%多聚甲醛灌注固定，腦組織石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片，HE染色和免疫組織化學染色（SABC法），光鏡觀察海馬組織神經元損傷程度和TNF—α、Bcl—2、Bax的陽性表達，Image pro plus6.0

3、軟件測定TNF—α、Bcl—2、Bax平均光密度。 結果：①定位航行實驗：模型組大鼠從第三天開始逃避潛伏期由假手術組（32.45±15.39）秒增加到（43.28±18.76）秒（P<0.01）；纈沙坦聯(lián)合川芎嗪用藥組大鼠從第四天開始逃避潛伏期由模型組（21.83±9.72）秒縮短為（16.54±7.98）秒（P<0.01）；纈沙坦組和川芎嗪組從第四天分別縮短為（18.13±8.92）秒和（18.15±8.59）秒（P<0.05

4、）?？臻g探索實驗：模型組大鼠跨越平臺次數(shù)，在平臺象限停留的時間和在平臺象限游程占總游程的百分比分別由假手術組（6.30±2.54）次/120秒，（51.43±10.66）秒和（38.32±8.49）%減為（3.44±1.67）次/120秒，（35.28±9.99）秒和（29.65±6.44）%（P<0.01）。纈沙坦聯(lián)合川芎嗪用藥組大鼠跨越平臺次數(shù)由模型組（3.44±1.67）次/120秒增加為（5.60±1.90）次/120秒（P<0

5、.05），大鼠在平臺象限停留的時間及平臺象限游程占總游程的百分比由模型組（35.28±9.99）秒、（29.65±6.44）%增加為（49.74±8.30）秒和（37.07±6.47）%（P<0.05），其它各用藥組與模型組比較無統(tǒng)計學意義。②模型組大鼠血漿中AngⅡ和TXB2含量分別由假手術組（125.23±15.49）ng/ml和（1101.07±71.20）ng/ml增加為（175.21±17.95）ng/ml和（1374.84±

6、39.54）ng/ml（P<0.01）；AVP和6—keto—PGF1α含量分別由假手術組（150.14±18.38）ng/ml和（754.33±97.86）ng/ml降低為（46.74±10.58）ng/ml和（240.64±23.29）ng/ml（P<0.01）。與模型組比，纈沙坦聯(lián)合川芎嗪用藥組血漿中TXB2含量分別由模型組（1374.84±39.54）ng/ml降低為（1204.53±20.54）ng/ml（P<0.01）；An

7、gⅡ、AVP和6—keto—PGF1α含量分別由模型組（175.21±17.95）ng/ml，（69.39±11.96）ng/ml和（240.64±23.29）ng/ml增加為（330.49±18.46）ng/ml，（92.58±16.88）ng/ml和（489.08±72.61）ng/ml（P<0.01，P<0.05）；纈沙坦組血漿中TXB2含量降低為（1293.39±35.81）ng/m1（P<0.05），AngⅡ和6—keto—P

8、GF1α含量分別增加為（256.86±30.48）ng/ml和（346.51±48.76）ng/ml（P<0.01，p<0.05）：川芎嗪組血漿中TXB2含量降低為（1287.49±40.27）ng/ml（P<0.01），AngⅡ、AVP和6—keto—PGF1α含量分別增加為（231.46±38.34）ng/ml，（105.57±19.82）ng/ml和（336.01±47.25）ng/ml（P<0.01，P<0.05）。③模型組大鼠

9、海馬組織SOD和GSH—Px活性由假手術組（318.35±58.80）U/mgprot和（46.57±12.87）酶活力單位降低為（113.41±58.40）U/mgprot和（16.31±5.76）酶活力單位（P<0.01）；MDA、NO的含量和iNOS活性由假手術組（2.94±1.47）nmol/mgprot，（16.12±6.31）μmol/gprot和（2.16±1.43）U/mgprot增加為（7.41±3.92）nmol/m

10、gprot，（33.51±12.00）μmol/gprot和（9.97±3.87）U/mgprot（P<0.01）。與模型組相比，纈沙坦聯(lián)合川芎嗪用藥組大鼠海馬組織SOD和GSH—Px活性由模型組（113.41±58.40）U/mgprot和（16.31±5.76）酶活力單位增加為（241.67±80.07）U/mgprot和（37.26±14.51）酶活力單位（P<0.01）； MDA、NO含量和iNOS活性由模型組（7.41±3.9

11、2）nmol/mgprot，（33.51±12.00）μmol/gprot和（9.97±3.87）U/mgprot下降為（3.32±1.85）nmol/mgprot，（20.30±12.64）μmol/gprot和（2.47±1.99）U/mgprot（P<0.01，P<0.05）；與模型組相比，纈沙坦組和川芎嗪組可顯著提高大鼠海馬組織SOD、GSH—Px活性，降低MDA、NO含量和iNOS活性（P<0.05）。④RT—PC半定量觀察：

12、海馬IL—1βmRNA的表達：電泳結果顯示各組748bp處均可見明顯的擴增帶，為甘油醛—3—磷酸脫氫酶（GAPDHmRNA）擴增條帶，在377bp處有強弱不同但邊界清楚的條帶為IL—1βmRNA的擴增片段。半定量密度分析結果表明：模型組大鼠海馬組織IL—1βmRNA由假手術組0.409±0.046增加為0.591±0.048（P<0.01）；纈沙坦聯(lián)合川芎嗪用藥組大鼠海馬組織IL—1βmRNA由模型組0.591±0.048降低為0.53

13、0±0.039（P<0.01）；其它各用藥組與模型組比較無統(tǒng)計學意義。⑤病理組織學觀察（HE染色）：假手術組海馬組織神經元排列整齊，形態(tài)完整；細胞數(shù)量較多，細胞形態(tài)正常，體積較大，核居中，大而圓，染為淡藍色，核仁核膜清晰，核仁染為紫色，胞質著色淺而均勻。模型組大鼠海馬組織神經元排列紊亂，數(shù)目減少，胞核固縮濃染。各用藥組均能改善上述神經元損傷，使大鼠海馬神經元排列較整齊，神經元數(shù)目明顯增加，使胞漿濃縮，胞核固縮深染現(xiàn)象改善，纈沙坦聯(lián)合川芎

14、嗪用藥組更加顯著。⑥免疫組織化學檢測：與假手術組相比，模型組大鼠海馬TNF—α表達呈強陽性，細胞呈棕黃色，為卵圓形、梭形，大多為膠質細胞；Bcl—2、Bax陽性神經元胞漿有棕黃色物質沉積。與模型組相比，各用藥組TNF—α和Bax表達減弱，Bcl—2表達增強。模型組大鼠海馬組織TNF—α、Bcl—2、Bax表達分別由假手術組0.116±0.006，0.059±0.009，0.039±0.003增加為0.217±0.008，0.237±0.

15、004和0.253±0.003（P<0.01）。纈沙坦聯(lián)合川芎嗪用藥組大鼠海馬組織TNF—α和Bax表達由模型組0.217±0.008，0.253±0.003降低為0.167±0.005，0.198±0.009（P<0.01）.Bcl—2表達由模型組0.237±0.004增加為0.279±0.005（P<0.01）；纈沙坦組TNF—α，和Bax表達降低為0.183±0.009和0.233±0.004（P<0，05，P<0.01），Bcl

16、—2增加為0.262±0，005（P<0.05）；川芎嗪組Bax表達降低為0.217±0.005（P<0.01），Bcl—2增加為0.272±0.010（P<0.01）。 結論：1采用2—VO+硝普鈉降壓法成功地建立了缺血再灌注致腦損傷的VD大鼠模型。2纈沙坦和川芎嗪單獨應用均具有一定改善VD大鼠學習記憶能力的作用；纈沙坦與川芎嗪聯(lián)合用藥較好地改善了VD模型大鼠的學習記憶能力。3纈沙坦與川芎嗪聯(lián)合用藥改善2—VO+硝普鈉降壓法制

17、備的VD大鼠的學習記憶能力的途徑有：①減輕缺血再灌注所致自由基形成增加及其所致鈣超載和RAS系統(tǒng)激活所致自由基形成增加對VD大鼠海馬神經元的損傷。②抑制中樞RAS激活，對抗RAS激活本身對大鼠海馬神經元的損傷及其所致自由形成增加和炎性反應對大鼠海馬神經元的損傷。③減輕缺血再灌注本身及其所致細胞內鈣超載和RAS激活引起的炎癥反應對VD大鼠海馬神經元的損傷。④抑制缺血缺氧、大量氧自由基、鈣超載激活—系列鈣依賴性酶促反應、線粒體損傷等誘導引起