胃乙醇脫氫酶與胃癌特征的相關(guān)性分析及酒精對(duì)胃癌細(xì)胞株作用的研究.pdf

1、背景與目的:
　　 胃癌是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，胃癌的發(fā)生是多因素長(zhǎng)期作用的結(jié)果，胃癌的發(fā)病率存在明顯的國(guó)家和地區(qū)差異。胃癌的確切病因尚未完全闡明，有研究顯示，幽門螺桿菌感染、飲食、吸煙及宿主的遺傳易感性是影響胃癌發(fā)生的重要因素。飲酒與胃癌發(fā)生的危險(xiǎn)相關(guān)度目前仍有爭(zhēng)議。攝入酒精可直接刺激胃粘膜，與其代謝中間產(chǎn)物乙醛等因素共同造成胃粘膜損傷，導(dǎo)致胃粘膜上皮易受致癌物質(zhì)侵犯或/和直接影響并導(dǎo)致粘膜上皮的惡性變。酒精的代謝過程中乙

2、醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，ADH)起著至關(guān)重要的作用，它主要分布在肝臟，在胃腸道及其他組織中也有少量分布，ADH是酒精代謝的限速酶，決定局部組織、血液中酒精及代謝產(chǎn)物的濃度，是飲酒過程影響人體的決定性因素之一。ADH的水平與胃癌的發(fā)生是否相關(guān)尚不明確。為進(jìn)一步探討酒精刺激對(duì)胃癌細(xì)胞的作用，本研究收集胃癌患者組織標(biāo)本及其臨床資料，檢測(cè)胃癌及癌旁組織中ADH表達(dá)并分析其與臨床及病理特征等因素的相關(guān)性。然后通過細(xì)胞

3、學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究，采用不同濃度梯度酒精刺激不同胃癌細(xì)胞株，初步評(píng)價(jià)不同濃度梯度酒精對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響，分析酒精干預(yù)后ADH在不同胃癌細(xì)胞株的表達(dá)水平，在細(xì)胞水平探索酒精對(duì)胃癌細(xì)胞的作用。
　　 方法:
　　 1、收集胃癌患者的臨床資料及組織標(biāo)本，采用組織芯片技術(shù)處理胃癌及癌旁組織，免疫組化技術(shù)檢測(cè)乙醇脫氫酶在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況，觀察不同胃組織中乙醇脫氫酶的表達(dá)情況，探討臨床特征、ADH表達(dá)與胃癌預(yù)后及臨床病理

4、特征之間的關(guān)系。
　　 2、采用不同濃度梯度的酒精(0.03125％、0.0625％、0.125％、0.25％、0.5％、1％、2％、4％、6％)處理MGC803、BGC823和SGC7901三種不同胃癌細(xì)胞株，以MTT法檢測(cè)酒精對(duì)細(xì)胞增殖的影響，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　 3、采用WESTERN BLOT技術(shù)檢測(cè)不同濃度酒精(0.125％、0.25％、0.5％)處理MGC803、BGC823和SGC7901三種

5、胃癌細(xì)胞株乙醇脫氫酶的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、胃癌患者臨床及病理資料統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果:
　　 (1)101例胃癌患者中男性64例，女性37例，年齡28-75歲，平均年齡57.46±10.88歲。
　　 (2)胃癌組織ADH表達(dá)水平與飲酒情況和胃癌TNM分期有關(guān)(p＜0.05);癌旁組織ADH表達(dá)水平則與年齡相關(guān)(p＜0.05)。
　　 (3)胃癌組織ADH不同表達(dá)生存曲線呈現(xiàn)有意義分離(P

6、＜0.05);危險(xiǎn)及有害飲酒組與正常飲酒及未飲酒組的生存曲線出現(xiàn)分離(P＜0.05)。
　　 (4) COX風(fēng)險(xiǎn)比例模型單因素分析顯示:年齡因素、飲酒情況、ADH癌旁表達(dá)、陽(yáng)性淋巴結(jié)數(shù)及腫瘤TNM分期等因素與胃癌預(yù)后相關(guān)(P＜0.05); COX風(fēng)險(xiǎn)比例多因素分析顯示，年齡與腫瘤TNM分期是胃癌預(yù)后相關(guān)的危險(xiǎn)因素(P=0.000)，ADH癌組織中表達(dá)可能影響胃癌預(yù)后(P=0.064)（注:多因素COX回歸分析，方法用后退法，進(jìn)入

7、標(biāo)準(zhǔn)為0.05，刪除標(biāo)準(zhǔn)為0.10。）。
　　 2、0.03125％-6％濃度梯度的酒精作用于MGC803、BGC823和SGC7901三種胃癌細(xì)胞株48h后，可顯著抑制胃癌細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡。
　　 3、0.125％、0.25％、0.5％濃度的酒精作用予MGC803、BGC823和SGC7901三種胃癌細(xì)胞48h后，其ADH的表達(dá)顯著增加，且與酒精濃度呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1、胃

8、癌及癌旁組織臨床資料及ADH表達(dá)分析結(jié)論:
　　 (1)胃癌組織ADH表達(dá)水平與飲酒情況和胃癌TNM分期有關(guān)，癌旁組織ADH表達(dá)水平與年齡相關(guān)。
　　 (2)胃癌組織ADH高表達(dá)組生存優(yōu)于低表達(dá)組，正常及無(wú)飲酒組生存優(yōu)于危險(xiǎn)及有害飲酒組。
　　 (3)年齡、腫瘤TNM分期是胃癌預(yù)后相關(guān)的危險(xiǎn)因素，ADH癌組織中表達(dá)可能影響胃癌預(yù)后。
　　 2、酒精可顯著降低胃癌細(xì)胞活性，較低濃度酒精同樣能抑制胃癌細(xì)胞增殖