過繼單一pMHC特異性的同種CTL清除體內特定性狀的靶細胞.pdf

1、由于移植排斥反應的存在，T細胞對于同種細胞的應答通常被認為是有害的。然而伴隨移植物抗宿主?。℅VHD）發(fā)生的移植物抗白血病反應/移植物抗腫瘤反應，表明了同種反應性T細胞中存在一群有利的細胞，在清除惡性腫瘤中具有巨大作用。我們的前期工作提示同種T細胞與一般抗原反應性T細胞一樣，識別的表位均為抗原肽/MHC復合物（pMHC），且均具有pMHC特異性，故在實際應用中有可能根據同種反應性T細胞的不同特異性將有利和不利的同種T細胞區(qū)分開。本研究擬

2、在單個pMHC水平上，提供實驗依據證實過繼單一表位特異性的同種CTL可在體內清除特定性狀的靶細胞，同時避免多組織損傷的發(fā)生。不僅有利于進一步認識同種反應發(fā)生的機制及其規(guī)律，而且為利用同種T細胞打破病理性耐受（慢性感染與腫瘤等）提供了新手段。
　　 然而由于細胞表面存在極其繁多的pMHC，用傳統(tǒng)的方法制備獲得的同種反應性T細胞為針對多種表位的細胞群體。因此，本研究通過建立“單一表位特異性同種T細胞誘導體系”制備單一表位特異性同種C

3、TL（胰島素肽/H-2Kb特異性同種CTL），并過繼輸入動物體內，攻擊表達該pMHC的靶細胞（H-2b小鼠的胰島b細胞），觀察其特異性殺傷效應。論文共分為三部分，其主要內容與結果如下：
　　 一、制備H-2Kb/IgG2aFc分子，其能有效結合到C3H小鼠巨噬細胞表面
　　 首先通過融合C57BL/6小鼠H-2Kb重鏈胞外段和IgG2aFc段獲得H-2Kb/IgG2aFc融合基因，并與小鼠小鼠β2m基因分別插入桿狀病毒雙

4、表達載體pFastBacTMDual的PP10和PPH啟動子下游，利用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達以二聚體形式存在的β2m/H-2Kb/IgG2aFc分子（簡稱H-2Kb二聚體）。融合分子中IgG2aFc為高親和力的Fc，可通過與FcR的相互作用加載H-2Kb二聚體到C3H小鼠巨噬細胞（H-2Kk）表面，使其能夠 “提呈”單一同種表位（特異性肽/H-2Kb），從而為誘導單一pMHC特異性的同種CTL奠定了基礎。
　　 二、體內外聯(lián)合

5、誘導自身/同系淋巴細胞產生胰島素肽/H-2Kb特異性的同種CTL
　　 利用加載了胰島素肽/H-2Kb二聚體的自身巨噬細胞作為抗原刺激細胞，經過腹腔注射C3H小鼠（H-2Kk），誘導其產生針對胰島素肽/H-2Kb表位的特異性同種T細胞，收集并對其進行特異性四聚體染色和細胞毒效應檢測。結果顯示誘導產生的CD8+T細胞特異性四聚體染色頻率顯著高于非特異性四聚體染色頻率；同時，該CTL對具有相應表位（胰島素肽/H-2Kb）的靶細胞具

6、有明顯的殺傷作用，而對無關表位的靶細胞殺傷率極低。
　　 三、尾靜脈過繼誘生的單一pMHC特異性的同種T細胞定向損傷胰島β細胞
　　 將胰島素肽/H-2Kb特異性CTL由尾靜脈分別過繼受者C57BL/6小鼠(H-2b)、B6C3F1小鼠（H-2b×k）和SCID beige小鼠（H-2d），過繼后監(jiān)測血糖、胰島素及淋巴細胞浸潤情況。結果顯示接受過繼后，受者C57BL/6和B6C3F1小鼠第3天便出現(xiàn)明顯的血糖升高，胰島素