復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)理的探討.pdf

1、目的：通過觀察復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖過程中Notch信號(hào)通路的調(diào)控作用，闡明復(fù)方扶芳藤合劑促進(jìn)BMSCs增殖的作用機(jī)理，試述復(fù)方中藥抗衰老的科學(xué)內(nèi)涵。
　　方法：(1)采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，建立穩(wěn)定的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系，通過細(xì)胞形態(tài)觀察不同階段細(xì)胞生長(zhǎng)特征；(2)MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期、表面標(biāo)志；向成骨方向行誘導(dǎo)分化；對(duì)BMSCs進(jìn)行鑒定；(3)將30只雄性SD大鼠隨機(jī)

2、分為二組，每組15只，分別為復(fù)方扶芳藤合劑灌胃的藥物干預(yù)組和生理鹽水灌胃的陰性對(duì)照組；取灌胃后10%藥物血清及陰性對(duì)照組的血清分別對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，采用MTT法檢測(cè)復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠BMSCs增殖的影響；(4)通過RT-PCR檢測(cè)Notch1、Jagged1、hes1的mRNA表達(dá)水平在干預(yù)前后的表達(dá)變化；(5)通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Notch1、Jagged1的蛋白在干預(yù)前后的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：(1)

3、顯微鏡下觀察全骨髓貼壁法分離純化培養(yǎng)的 BMSCs以梭形為主，呈放射狀排列的細(xì)胞集落，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛；(2)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈S形，細(xì)胞生長(zhǎng)周期為7d。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期示 BMSCs處于G0/G1期的細(xì)胞為82.7%，BMSCs均一地表達(dá)細(xì)胞表面分子抗原CD44、CD90，陽性率分別為，99.4%、99.7%，而CD45呈陰性，陽性率為0.21%。堿性磷酸酶（ALP）染色、茜素紅染色呈陽性。檢測(cè)顯示其符合正常間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)特征且生長(zhǎng)活

4、躍；(3)MTT結(jié)果顯示與生理鹽水陰性對(duì)照組相比，復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可明顯促進(jìn) BMSCs增殖（P<0.05）；(4)RT-PCR結(jié)果顯示藥物干預(yù)組Notch1、Jagged1、hes1的mRNA表達(dá)水平均高于陰性對(duì)照組（P<0.05）；(5)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示藥物干預(yù)組Notch1、Jagged1蛋白表達(dá)均高于陰性對(duì)照組（P<0.05）。
　　結(jié)論：(1)復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可促進(jìn)BMSCs的增殖；(2)在復(fù)方扶芳藤合劑