2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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1、該研究在原有構建的抗CD71 ScFv表達載體pUC19/119基礎上,設計一對引物,5'端引入HindⅢ酶切位點,3'端引入Xba Ⅰ酶切位點.采用PCR方法,擴增出ScFv基因.并將其與T載體相連.轉化大腸桿菌,陽性菌進行序列測定.結果所擴增的ScFv與原McAb基因相比序列組成基本吻合.將ScFv-pGEM-T和含有PE毒素的表達載體pSW202(含有HindⅢ,XbaⅠ兩個酶切位點),用HindⅢ和Xba Ⅰ進行雙酶切.挑取2株

2、陽性菌經(jīng)IPTG誘導,誘導細菌經(jīng)超聲破碎及尿素等處理,對表達產(chǎn)物進行初步純化.對初步純化的融合蛋白進行體外效應研究,經(jīng)間接免疫熒光法與細胞ELISA示檢測,此融合蛋白能與表面表達CD71受體的細胞特異性結合,而不與CD71受體陽性的細胞發(fā)生反應.細胞ELISA競爭抑制法顯示,此融合蛋白能阻止McAb與CD71受體結合,且隨融合蛋白濃度升高,其抑制作用越強.MTT法檢測重組毒素的細胞毒作用,結果顯示,此融合蛋白對表面CD71受全陽性的細胞

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