PP2A和JNK在TBT誘導(dǎo)的體內(nèi)外細(xì)胞凋亡中的重要作用.pdf

1、三丁基錫(Tributyltin，TBT)是具有極強毒性的環(huán)境污染物，已經(jīng)有大量報道顯示TBT能引起哺乳類動物免疫、神經(jīng)、生殖以及肝毒性，而凋亡的誘導(dǎo)一直被認(rèn)為是TBT產(chǎn)生毒性最主要的機制。以往大多數(shù)研究都將TBT誘導(dǎo)凋亡的機制集中在Bax和Bcl-2調(diào)控的線粒體凋亡途徑。然而，凋亡的調(diào)控是一個錯綜復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，越來越多研究指出在這條通路的上游以及轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程還受到其它信息分子的調(diào)控，尚待更深入探究。此外，以往對TBT誘導(dǎo)凋亡機制的探討多采

2、用體外培養(yǎng)的細(xì)胞模型，很少有研究將體外研究結(jié)果延伸到動物活體實驗作進(jìn)一步證實。
　　 本研究首先以人羊膜FL細(xì)胞為靶細(xì)胞，在TBT誘導(dǎo)凋亡中，圍繞蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A，PP2A)檢測與其在凋亡調(diào)控中密切相關(guān)的因素如微管骨架和MAPKs家族的改變、探討PP2A對微管骨架和MAPKs調(diào)控作用，并進(jìn)一步確定參與TBT誘導(dǎo)凋亡的MAPKs家族成員及其作用的靶分子。在此基礎(chǔ)上，以小鼠肝臟為靶器官，將

3、體外實驗的結(jié)果在體內(nèi)進(jìn)行更進(jìn)一步證實，通過體內(nèi)外實驗結(jié)果的比較，確定TBT細(xì)胞毒性作用的靶分子，為TBT致毒機理闡述提供有力的理論依據(jù)。
　　 主要結(jié)果：
　　 1.TBT在誘導(dǎo)FL細(xì)胞凋亡中，明顯抑制PP2A酶活性，并下調(diào)其調(diào)節(jié)亞基B55α表達(dá)和催化亞基CLeu309位點甲基化修飾水平。
　　 2.TBT促使PP2A從微管解離，并導(dǎo)致FL細(xì)胞微管骨架解聚。
　　 3.TBT活化FL細(xì)胞JNK和p38及其

4、下游轉(zhuǎn)錄因子c-Jun和ATF-2。
　　 4.TBT通過下調(diào)FL細(xì)胞Raf表達(dá)，使其下游激酶MEK1/2和ERK1/2以及轉(zhuǎn)錄因子c-Myc脫磷酸，導(dǎo)致ERK通路被抑制。
　　 5.抑制JNK的活化能夠明顯抑制TBT對FL細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)，但p38被抑制對此過程沒有影響。
　　 6.抑制JNK的活化明顯抑制TBT對caspase-3的激活，但對Bcl-2的表達(dá)和磷酸化水平，以及Bax表達(dá)和定位沒有影響。
　

5、　 7.經(jīng)口攝入TBT抑制小鼠肝細(xì)胞PP2A酶活性，并使小鼠肝細(xì)胞ROS水平升高。
　　 8.經(jīng)口攝入TBT激活小鼠肝細(xì)胞ERK、JNK和p38MAPKs。
　　 9.經(jīng)口攝入TBT誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞凋亡主要體現(xiàn)在DNA鏈的斷裂(TUNEL法)、染色質(zhì)濃縮并發(fā)生邊聚化、以及凋亡關(guān)鍵調(diào)控蛋白Bax/Bcl-2比值上調(diào)和執(zhí)行酶caspase-3激活。
　　 主要結(jié)論：
　　 1、在體內(nèi)和體外研究中，TBT誘導(dǎo)凋

6、亡的方式不同。體外實驗中TBT誘導(dǎo)FL細(xì)胞可能至少部分以線粒體非依賴途徑發(fā)生凋亡，而在體內(nèi)實驗TBT誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞發(fā)生線粒體依賴途徑凋亡。
　　 2、TBT在體內(nèi)和體外研究中誘導(dǎo)凋亡方式的不同必然與體內(nèi)外凋亡的調(diào)控機制相關(guān)。體外實驗TBT誘導(dǎo)FL細(xì)胞凋亡主要通過PP2A的抑制和隨之引起微管解聚以及JNK/c-Jun的活化，活化的JNK/c-Jun直接激活caspase-3誘導(dǎo)凋亡；而體內(nèi)實驗TBT誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡的可能機制是PP2