中國野生篤斯越橘花青素的提取分離、組分分析及抗氧化活性的研究.pdf

1、本研究以新鮮干凈的野生越橘果經(jīng)勻漿破碎、離心分離出來的果渣為原料，用預冷的丙酮提取越橘原花青素，其最佳提取工藝參數(shù)為提取溫度4℃，提取溶劑75％丙酮，料液比1:3(V:V)，提取時間1 h。反應液離心收集上清，過濾、真空濃縮至丙酮全部蒸出，回收的丙酮可重復利用，濃縮液經(jīng)混合非極性溶劑萃取后，即得越橘原花青素上柱液。 HP-2MG型大孔吸附樹脂對越橘原花青素的純化效果最好，吸附率90.8％，解吸率96.0％。大孔吸附樹脂濕法裝柱

2、，預處理后備用。在濃縮萃取液上柱前，先將柱子用通入氮氣的脫氧水洗脫1～2個體積，以排除柱中氧氣，防止越橘原花青素被氧化，且將柱子用錫箔紙包裹，達到避光效果。上柱至大孔樹脂吸附飽和，再用通入氮氣的脫氧水沖洗至沖洗液無明顯顏色。然后再用10％—50％—75％—95％乙醇進行沖洗，各濃度乙醇pH3～6，且保持通入氮氣，以保持體系的穩(wěn)定性。以0.5～4個柱體積/小時的速度洗脫，收集洗脫液。洗脫液顏色很淺時，停止上柱，記錄各洗脫液體積。將收集到的

3、10％、50％、75％、95％的洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮；將濃縮液冷凍干燥，程序為： -40℃→-30℃→-20℃→-10℃→-5℃ 2h2h2h2h10h用香草醛法測得其總黃烷醇含量為95％，其得率為0.72％。 采用反相高效液相色譜法和電噴霧質(zhì)譜法對中國野生篤斯越橘中花青素組分進行分離和分析。經(jīng)HP-2MG型大孔吸附樹脂柱層析得到越橘花青素樣品溶液，采用Alltima C18反相色譜柱(250 mm×4.6

4、 mm，5μm)，以2％甲酸水溶液(A)和2％甲酸/甲醇溶液(B)作為流動相，分2個梯度對花青素組分進行洗脫，將其主要洗脫峰在電噴霧正離子模式下進行分析，根據(jù)質(zhì)譜的準分子離子[M+H](m/z)檢測其聚合度。結(jié)果表明野生越橘花青素的提取物被展開成8個主要的洗脫峰，以峰面積計算，主要洗脫峰總含量達85％。經(jīng)質(zhì)譜分析，其中4號峰、8號峰、12號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素單體，6號峰、10號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素二

5、聚體，7號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素三聚體，13號峰和14號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素四聚體。結(jié)果表明我國野生篤斯越橘中含有較豐富的花青素，低聚體是其中的主要成分。本實驗結(jié)果為進一步研究我國大興安嶺野生篤斯越橘花青素的組成情況提供了依據(jù)，對于開展其后續(xù)的結(jié)構(gòu)、功能、質(zhì)量檢測以及生產(chǎn)開發(fā)研究都具有一定的參考價值。 為進一步研究越橘原花青素的性質(zhì)，本研究以本實驗室制備的越橘原花青素單體——兒茶素與表兒茶素的混

6、合物(記為PCM組)、越橘原花青素的二聚體各異構(gòu)體的混合物(記為PCD組)、聚合度>2的越橘原花青素混合物(記為PCT組)為研究對象，對越橘原花青素做還原能力的測定。實驗結(jié)果表明：隨著越橘原花青素聚合度的相對平均分子質(zhì)量降低和相對分子質(zhì)量分布變窄，其還原能力增強即PCM