神經(jīng)降壓肽在脊髓前角的分布及其在神經(jīng)病理痛中的作用研究.pdf

1、神經(jīng)降壓肽(neurotensin,NT)是含有13個氨基酸殘基的腦腸肽，廣泛分布于哺乳動物中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)以及胃腸道內(nèi)，參與了眾多的生物效應(yīng)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中研究較多的是其對痛覺的調(diào)制作用。其中脊髓水平的神經(jīng)降壓肽主要來源于脊髓固有神經(jīng)元內(nèi)，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，并推測該鎮(zhèn)痛作用是由其高親和力受體(NTR1)或低親和力受體(NTR2)介導(dǎo)的。已證實，脊髓前角和后角都含有神經(jīng)降壓肽，對后角神經(jīng)降壓肽的分布已有了較詳細的報道，而對其在前角

2、的分布卻知之甚少。另外，參與痛覺調(diào)制的神經(jīng)降壓肽具體來自于脊髓的何種神經(jīng)元亦不明確。本研究首先應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法觀察了脊髓前角內(nèi)神經(jīng)降壓肽的分布特點，再利用慢性壓迫性坐骨神經(jīng)痛模型觀察脊髓前角和后角的神經(jīng)降壓肽在神經(jīng)病理痛條件下有何變化，從而初步探討了脊髓水平神經(jīng)降壓肽在痛覺調(diào)制中可能的機制。 一.脊髓前角神經(jīng)降壓肽的分布 本研究首先利用經(jīng)典的尼氏染色法和標記乙酰膽堿酯酶的Karnovsky-Roots法來顯示脊髓前角的運動

3、神經(jīng)元，再利用免疫組織化學(xué)技術(shù)應(yīng)用神經(jīng)降壓肽抗體觀察脊髓前角內(nèi)神經(jīng)降壓肽免疫陽性神經(jīng)元的分布特點，通過對二者的比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 脊髓前角神經(jīng)降壓肽免疫陽性細胞可分為大、小兩種。其中大細胞主要分布在前角前外側(cè)(第Ⅸ層)，多為多極神經(jīng)元或雙極神經(jīng)元，與尼氏染色和乙酰膽堿酯酶顯色顯示的脊髓前角運動神經(jīng)元具有明顯的一致性，可認為該類陽性細胞可能為運動神經(jīng)元(包括α和γ神經(jīng)元)；小陽性細胞則散在分布于前角各個區(qū)域，除可能為調(diào)節(jié)性中間神經(jīng)元

4、外，尚不能推測該類陽性細胞為何種神經(jīng)元。 二.慢性壓迫性坐骨神經(jīng)痛模型的制備 成年雄性SD大鼠隨機分為模型組、假手術(shù)組和正常組。其中模型組大鼠通過5--0鉻制羊腸線結(jié)扎單側(cè)坐骨神經(jīng)建立慢性壓迫性坐骨神經(jīng)痛模型，假手術(shù)組大鼠處理除未結(jié)扎神經(jīng)外同模型組，正常組大鼠未做任何處理。采用意大利產(chǎn)UGO-BASILE37300型輻射熱測痛儀，以大鼠術(shù)側(cè)后足抬腿潛伏期為其痛閾反映值，連續(xù)監(jiān)測其痛閾及行為變化。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：

5、 模型組大鼠術(shù)后第一天即開始出現(xiàn)術(shù)側(cè)自發(fā)抬足、舔足以及不敢持重等自發(fā)性疼痛和感覺異常現(xiàn)象，痛閾亦隨之降低，5-7天達到高峰，伴有足趾屈曲內(nèi)翻等畸形，安靜時臥于健側(cè)，至13-14天上述現(xiàn)象逐漸消失，但足趾屈曲內(nèi)翻以及跛行等畸形無明顯恢復(fù)。假手術(shù)組大鼠無上述典型現(xiàn)象出現(xiàn)。三組大鼠偶有輕微自嗜癥狀。 三.神經(jīng)病理痛條件下脊髓水平神經(jīng)降壓肽含量上調(diào) 正常狀態(tài)下在脊髓水平給予外源性神經(jīng)降壓肽具有明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。為探討神經(jīng)病理痛條

6、件下脊髓水平內(nèi)源性神經(jīng)降壓肽是否上調(diào)，本研究利用神經(jīng)病理痛模型，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)等形態(tài)學(xué)方法以及監(jiān)測大鼠痛閾等行為學(xué)手段，分別在大鼠痛閾最低期(第七天)和恢復(fù)期(第十四天)觀察模型組、假手術(shù)組和正常組大鼠脊髓腰膨大處神經(jīng)降壓肽的含量變化。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1.在前角前外側(cè)(含第Ⅸ層)，模型組大型神經(jīng)降壓肽免疫陽性細胞數(shù)和陽性面積無論在第7天還是在第14天都與假手術(shù)組和正常組之間沒有顯著性差異，即在痛閾最低期和痛閾恢復(fù)期都

7、沒有明顯變化；與其同一視野的小型陽性細胞，其細胞個數(shù)無論在第7天還是在第14天都與假手術(shù)和正常組之間有顯著性差異(P＜0.01)即在痛閾最低期明顯增多，至恢復(fù)期有所減少，但均高于假手術(shù)和正常組；在前角內(nèi)側(cè)(約在第Ⅷ層內(nèi))，小型陽性細胞的細胞個數(shù)在第7天與假手術(shù)組和正常組之間有顯著性差異(P＜0.01)，但在第14天三組之間沒有顯著性差異，即在痛閾最低期前角內(nèi)側(cè)小陽性細胞也明顯增多，至恢復(fù)期降到正常組水平。在脊髓其他部位(包括后角)小型陽

8、性細胞的數(shù)量在三組之間沒有顯著性差異。 2.模型組大鼠在第7天其脊髓后角膠狀質(zhì)(SG)內(nèi)的神經(jīng)降壓肽含量顯著升高，呈明顯的眉毛狀結(jié)構(gòu)，而在恢復(fù)期神經(jīng)降壓肽含量下降，眉毛狀結(jié)構(gòu)隨之消失。在假手術(shù)組大鼠和正常組大鼠沒有觀察到這一現(xiàn)象。 綜上所述，本研究在核團水平和細胞水平觀察了神經(jīng)降壓肽在脊髓前角的分布，初步認為脊髓前角運動神經(jīng)元內(nèi)(包括α和γ神經(jīng)元)含有神經(jīng)降壓肽，另外神經(jīng)降壓肽還存在于前角某些調(diào)制性中間神經(jīng)元內(nèi)。神經(jīng)病理