2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗以磺酰磺隆和鄰甲氧羰基苯磺酰胺為研究對象,采用琥珀酸酐法,分別合成了目標分析物的半抗原SMH和MSH。采用活性酯法將半抗原與載體蛋白BSA共價偶聯(lián),制備了人工抗原,經(jīng)紫外掃描確定偶聯(lián)成功后,分別以SMH-BSA和MSH-BSA為免疫原免疫新西蘭白兔,分別獲得了針對兩種半抗原的特異性抗血清。雙向瓊脂擴散法測定抗血清效價大于32/1后采集血清。以硫酸銨分步鹽析法分離抗血清中的抗體,冷凍干燥后.20℃保存。用活性酯法制備了酶標半抗原SM

2、H.HRP和MSH-HRP,酶標記物既保持了免疫化學特性,又保持了酶活性,可用于免疫化學分析。 篩選了包被抗體一酶標半抗原(E-H)直接競爭ELISA法中最合適的抗體包被濃度、酶標半抗原稀釋倍數(shù)以及反應所用磷酸鹽緩沖液(PB)的pH值、濃度等。結(jié)果表明:在中性略偏堿條件下有利于抗體在酶標板上的吸附,在中性略偏酸性條件下有利于抗原抗體的親和反應。在一定范圍內(nèi)增大PB的濃度有利于抗體與目標物的親和。甲醇對抗原抗體的親和力影響較大,乙

3、腈影響相對較小,但試驗中其含量應小于5%。 成功建立了磺?;锹≈苯痈偁幟嘎?lián)免疫吸附分析法。方陣試驗確定了抗體最佳包被濃度和酶標半抗原(SMH-HRP)最佳稀釋度。在優(yōu)化條件下,建立了磺酰磺隆的標準抑制曲線,回歸方程為:I=29.292logC+111.07,R<'2>=0.9941,線性范圍為0.2~200mg/mL,相對標準偏差RSD=10.53%(n=5),IC<,50>=8.3ng/mL,IC<,20>=0.8ng/mL。

4、在相同條件下,測定常用磺酰脲類除草劑對抗原抗體的交叉反應性,結(jié)果顯示交叉反應率<0.04%。 在空白土壤中分別添加磺酰磺隆標樣,使土壤中磺酰磺隆含量分別為:1μg/g、0.1μg/g、0.01μg/.g。添加土樣用水/乙腈=1/1提取,E-H直接競爭ELISA法測定,重復4次。土壤中磺?;锹藴侍砑訚舛葹?μg/g水平時,ELISA測定的回收率82.3%~92.3%,RSD為3.47%;標準添加濃度為0.1μg/g水平時,ELI

5、SA測定的回收率99.8%~121.5%,RSD為9.80%;標準添加濃度為0.01μg/g水平時,ELISA測定的回收率102.3%~121.5%,RSD為7.78%。說明磺酰磺隆E-H直接競爭ELISA法能滿足其殘留分析的要求。這為磺酰磺隆的殘留分析提供了一個新的分析技術(shù)。 成功建立了具鄰甲氧羰基苯磺酰脲共同結(jié)構(gòu)化合物的直接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法。方陣試驗確定了抗體最佳包被濃度和酶標半抗原(MSH-HRP)最佳稀釋度。在優(yōu)化

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