血必凈注射液對(duì)離體大鼠缺血再灌注心肌的保護(hù)作用.pdf

1、目的: 心肌缺血再灌注損傷是臨床實(shí)踐中常見的組織器官損傷，其準(zhǔn)確機(jī)制仍不十分清楚。研究結(jié)果表明心肌缺血再灌注損傷是一種急性炎癥反應(yīng)，缺血再灌注時(shí)心肌組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)產(chǎn)生增加是導(dǎo)致心臟功能障礙和心肌細(xì)胞壞死的重要原因之一，抑制TNF-α的產(chǎn)生能減輕心肌細(xì)胞損傷、有助于缺血心肌功能的恢復(fù)。近年來(lái)，中藥防治心肌缺血再灌注損傷的研究取得了一定進(jìn)展。血必凈注射液是從36組中藥處方中篩選而來(lái)，具有抗細(xì)菌毒素、降低內(nèi)毒素水平

2、、調(diào)節(jié)免疫及炎性介質(zhì)、改善微循環(huán)、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。本研究應(yīng)用Langendorff離體心臟工作模型，排除了神經(jīng)體液及外周血管阻力等因素對(duì)藥物作用的影響，觀察血必凈注射液對(duì)心肌缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用，并探討其保護(hù)作用的可能機(jī)制。 材料與方法: 選擇健康Wister大鼠30只，體重250±50g，雌雄不限，按隨機(jī)化原則分成對(duì)照組與血必凈組，每組15只。實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔注射10％水合氯醛麻醉，腹腔注射肝素鈉500U

3、抗凝。開胸并迅速取出心臟，立即浸入4℃K-H液中，經(jīng)主動(dòng)脈插管以后連接于自制langendorff離體心臟灌注裝置上，以37℃K-H液逆行灌注，灌注壓恒定為70mmHg．經(jīng)15min的自然灌流平衡后，對(duì)照組及血必凈組分別用ThomasⅡ停搏液及含有血必凈注射液(4ml/kg)的ThomasⅡ停搏液進(jìn)行停搏。兩組心臟經(jīng)常溫(37℃)缺血30min后以37℃K-H液再灌注至復(fù)跳后120min。試驗(yàn)結(jié)束后留取部分左心室心肌立即放入10℃甲醛中

4、，固定12-20小時(shí)后制成臘塊標(biāo)本；另取部分左心室心肌于-70℃冰箱冰凍保存。分別計(jì)量缺血前、缺血再灌注30min、缺血再灌注60min、缺血再灌注90min、缺血再灌注120min的冠脈流出液流量(CF)，并留取各時(shí)點(diǎn)流出液3ml，用全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)其肌酸激酶(CK)含量；于光學(xué)顯微鏡下觀察心肌形態(tài)學(xué)變化；采用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)測(cè)定心肌再灌注120minTNF-α濃度。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均

5、數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，組間比較采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，兩兩比較用多重比較t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1、CF的變化：與對(duì)照組相比，血必凈組缺血再灌注以后各時(shí)間點(diǎn)的CF值明顯升高。 2、冠脈流出液中CK的變化：與對(duì)照組相比，血必凈組缺血再灌注以后各時(shí)間點(diǎn)的CK值明顯降低。 3、心肌形態(tài)學(xué)變化：對(duì)照組心肌細(xì)胞心內(nèi)膜水腫，部分區(qū)域心肌血管擴(kuò)張充血，心肌炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)：血必凈組心肌細(xì)

6、胞形態(tài)基本正常，水腫較輕。 4、心肌組織TNF-α的濃度變化：與對(duì)照組相比，血必凈組缺血再灌注以后的TNF-α值明顯降低。 討論: TNF-α是心肌缺血再灌注早期心肌細(xì)胞產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子，是一種自分泌的作用因子，在缺血再灌注損傷、膿毒癥、慢性心功能不全、病毒性心肌炎以及心臟同種移植排斥反應(yīng)中均能導(dǎo)致心肌功能能障礙和心肌細(xì)胞壞死。心肌組織進(jìn)行再灌注循環(huán)時(shí)，巨噬細(xì)胞和心肌細(xì)胞本身受刺激分泌產(chǎn)生TNF-α，然后通過兩

7、種途徑作用于血液中的白細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥及損傷的發(fā)生：(1)直接作用方式，一般在再灌注后10分鐘即出現(xiàn)白細(xì)胞的趨化移動(dòng)、積聚、并釋放化學(xué)物質(zhì)，導(dǎo)致再損傷發(fā)生。(2)TNF-α先作用于原發(fā)損傷部位的內(nèi)皮細(xì)胞，激活其表面無(wú)活性的白細(xì)胞趨化粘附因子，這種被激活的趨化粘附因子誘導(dǎo)白細(xì)胞向原發(fā)損傷部位移動(dòng)并粘附于損傷的組織細(xì)胞上，從而使白細(xì)胞釋放一系列化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致組織的再損傷。該過程一般較緩慢，在再灌注后4小時(shí)組織的再損傷達(dá)到高峰。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在心

8、肌缺血再灌注1小時(shí)和4小時(shí)除血漿TNF-α顯著增高外，代表中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)指標(biāo)的髓過氧化物酶在缺血心肌中也明顯增高。光鏡下也可見大量中性粒細(xì)胞在心肌中的浸潤(rùn)，TNF-α的釋放與中性粒細(xì)胞在心肌中的聚集密切相關(guān)，氧自由基損傷指標(biāo)脂質(zhì)過氧化物丙二醛含量在缺血心肌中也顯著升高。這些結(jié)果提示，心肌缺血再灌注時(shí)TNF-α增高同時(shí)伴有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和心肌損傷加重。因此，TNF-α是心肌缺血再灌注損傷過程中的一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)，抑制它的生成可能對(duì)于心肌

9、缺血再灌注損傷的保護(hù)起到?jīng)Q定作用。 血必凈注射液的有效成分紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸、芍藥苷、原兒茶醛主要從紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸等中草藥中提煉而來(lái)。研究表明血必凈注射液能有效拮抗內(nèi)毒素，下調(diào)促炎介質(zhì)水平，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，并可以保護(hù)受損內(nèi)皮、改善微循環(huán)，避免內(nèi)毒素攻擊所致的組織損傷。也有實(shí)驗(yàn)證實(shí)血必凈注射液治療可以明顯抑制肝、肺組織TNF-α蛋白水平上升幅度，并且能使其快速恢復(fù)至正常范圍。且其含有的多種中藥成分被證

10、實(shí)對(duì)于微血管損傷、中性粒細(xì)胞釋放、細(xì)胞凋亡等均有抑制作用。 本試驗(yàn)成功制作了大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，并在血必凈組中加入血必凈注射液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示與對(duì)照組相比：血必凈組缺血再灌注以后各時(shí)點(diǎn)CF值明顯增高、CK值明顯降低；光鏡下炎癥反應(yīng)及水腫程度明顯下降；心肌組織中TNF-α的含量明顯降低。結(jié)合心肌缺血再灌注損傷機(jī)制以及TNF-α對(duì)其影響來(lái)看，血必凈注射液可能通過減少氧自由基產(chǎn)生、保護(hù)心肌細(xì)胞膜、降低脂質(zhì)過氧化、減輕鈣超載、減輕

11、炎癥反應(yīng)、減少內(nèi)毒素攻擊并能抑制心肌TNF-α的生成，從而對(duì)心肌缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用。 結(jié)論: 1、血必凈注射液可以增加缺血再灌注心肌的CF，抑制心肌CK的釋放，具有減輕心肌細(xì)胞損傷、保護(hù)心肌細(xì)胞膜的作用。 2、血必凈注射液可以明顯改善缺血再灌注心肌的超微結(jié)構(gòu)，對(duì)缺血再灌注的心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用。 3、血必凈注射液可以顯著減少心肌組織TNF-α的生成，并可能通過抑制TNF-a的生成來(lái)實(shí)現(xiàn)其心肌保護(hù)作