慢性胃炎脾胃濕熱證與COX-2、細(xì)胞凋亡的關(guān)系及清濁安中湯的影響.pdf

1、脾胃濕熱證是脾胃實(shí)證中的一個(gè)常見證型，在消化系統(tǒng)疾病中占有重要的地位，研究它有助于脾本質(zhì)探索的深入開展。而動(dòng)物模型復(fù)制對(duì)脾胃濕熱證病因病機(jī)、新藥開發(fā)及提高臨床療效意義重大。本研究以“脾失健運(yùn)，水濕內(nèi)停，濕聚化熱，濕熱內(nèi)生”為理論切入點(diǎn)，通過(guò)病理炎癥、COX-2、Bcl-2蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡途徑探討脾胃濕熱證的發(fā)生機(jī)理和生物學(xué)基礎(chǔ)，同時(shí)觀察了清濁安中湯對(duì)脾胃濕熱證大鼠模型相關(guān)指標(biāo)的影響。 一、文獻(xiàn)研究通過(guò)對(duì)古代文獻(xiàn)回顧性研究，認(rèn)為

2、脾胃濕熱證大致經(jīng)歷了奠基、萌芽、形成、完善四個(gè)階段，形成了一套理法方藥較為完善的理論體系。中醫(yī)理論認(rèn)為脾胃濕熱證的病因病機(jī)主要為內(nèi)因或外因?qū)е缕⑹Ы∵\(yùn)，水濕內(nèi)停，濕聚化熱，濕熱內(nèi)生。其治療原則為清熱祛濕、調(diào)理脾胃。 關(guān)于脾胃濕熱證的現(xiàn)代研究，臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)較多，大同小異；脾胃濕熱證動(dòng)物模型研究不多，還未出現(xiàn)公認(rèn)的、可重復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)模型；脾胃濕熱證本質(zhì)的研究涉及到流行病學(xué)、胃腸形態(tài)與動(dòng)力學(xué)、炎癥、免疫、激素、微生態(tài)與HP感染、細(xì)胞能量代

3、謝、水通道蛋白與基因調(diào)控等多方面。 二、臨床實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)慢性胃炎脾胃濕熱證與細(xì)胞凋亡、COX-2蛋白表達(dá)的關(guān)系研究對(duì)象：選擇慢性淺表性胃炎患者55例，中醫(yī)辨證為脾胃濕熱證30例，脾虛證25例；正常健康者10例。 研究方法：所有觀察對(duì)象均于胃鏡下取胃竇部粘膜，內(nèi)鏡下和常規(guī)病理染色法觀察胃粘膜炎癥情況；采用免疫組化法檢測(cè)胃粘膜COX-2、Bcl-2的蛋白表達(dá)，原位末端標(biāo)記法檢測(cè)胃粘膜細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：慢性淺表性胃炎患

4、者胃鏡下胃粘膜可見不同程度的充血水腫，粘液附著，和脾虛證相比，脾胃濕熱證患者充血水腫更為明顯，多可伴有糜爛或出血點(diǎn)，胃粘液糊量偏多；病理檢查均見炎性細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。脾胃濕熱證與脾虛證在顯微鏡下炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度上均強(qiáng)于正常對(duì)照組(P＜0.01)，且它們之間亦有明顯差異(P＜0.05)。 細(xì)胞凋亡指數(shù)、Bcl-2、COX-2蛋白表達(dá)的情況：顯微鏡下觀察，凋亡細(xì)胞見于上皮細(xì)胞、壁細(xì)胞、主細(xì)胞；Bcl-2蛋白表達(dá)于壁細(xì)胞、主細(xì)胞、上

5、皮細(xì)胞的胞漿中。胃竇粘膜表面上皮、腺上皮和固有層間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中可見COX-2蛋白表達(dá)，但陽(yáng)性染色細(xì)胞多集中在表層上皮、胃小凹腺頸部和淺層固有腺。脾虛證組、脾胃濕熱證組的細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于正常組(P＜0.05)；脾虛證組的細(xì)胞凋亡指數(shù)高于脾胃濕熱證組(P＜0.05)。Bcl-2蛋白表達(dá)在脾虛證組、脾胃濕熱證組強(qiáng)于正常組(P＜0.05)；脾虛證組Bcl-2蛋白表達(dá)低于脾胃濕熱證組(P＜0.05)。COX-2蛋白表達(dá)脾虛證組、脾胃濕熱證組

6、強(qiáng)于正常組(P＜0.05)；脾胃濕熱證組的COX-2蛋白表達(dá)強(qiáng)于脾虛證組(P＜0.05)。 脾胃濕熱證組、脾虛組HP陽(yáng)性感染率高于正常對(duì)照組(P＜0.05)；脾胃濕熱證組的HP陽(yáng)性感染率顯著高于脾胃氣虛組(P＜0.05)。 炎癥程度分別與HP感染、COX-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)。 COX-2蛋白表達(dá)與舌質(zhì)紅、苔黃膩、體倦乏力、食少納呆呈正相關(guān)(P＜0.05)。 與胃脹痛、脹滿、肢體困重、大便溏

7、，無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。細(xì)胞凋亡、Bcl-2蛋白表達(dá)與患者舌脈癥無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。 三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)清濁安中湯對(duì)慢性胃炎脾胃濕熱證大鼠模型COX-2、細(xì)胞凋亡的影響實(shí)驗(yàn)對(duì)象：采用SPF級(jí)SD大鼠50只，雌雄各半。隨機(jī)分為5組，每組10只，分正常對(duì)照組、胃炎脾虛證組、胃炎濕熱證組、劑量2防治組、劑量1防治組。 實(shí)驗(yàn)方法：采用“病證結(jié)合”方法，以水楊酸鈉、蜂蜜、油脂、番瀉葉、人工氣候箱、清濁安中湯，造

8、成脾虛證、脾胃濕熱證胃炎模型，脾胃濕熱證胃炎防治模型。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：脾胃濕熱證胃炎大鼠出現(xiàn)納呆少飲，煩躁不安，體重減輕，毛發(fā)疏松粗糙，陰囊松弛下垂，大便不成形或稀便，小便黃、量少等。經(jīng)清濁安中湯治療后，上述癥狀減輕。 大鼠胃炎脾虛組與胃炎濕熱組胃粘膜炎癥比較嚴(yán)重，與正常組相比差異顯著(P＜0.05)，經(jīng)清濁安中湯治療后，胃粘膜炎癥積分明顯減少，與胃炎濕熱組相比顯著改善(P＜0.05)。 細(xì)胞凋亡指數(shù)、Bcl-2、C

9、OX-2蛋白表達(dá)的情況：顯微鏡下觀察，凋亡細(xì)胞見于上皮細(xì)胞、壁細(xì)胞、主細(xì)胞；Bcl-2蛋白表達(dá)于壁細(xì)胞、主細(xì)胞、上皮細(xì)胞的胞漿中。胃竇粘膜表面上皮、腺上皮和固有層間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中可見COX-2蛋白表達(dá)，但陽(yáng)性染色細(xì)胞多集中在表層上皮、胃小凹腺頸部和淺層固有腺。 脾胃濕熱證組與脾虛證組的細(xì)胞凋亡指數(shù)大于正常組(P＜0.05)，而脾胃濕熱證組低于脾虛證組(P＜0.05)，防治組小于脾胃濕熱證組而大于正常組(P＜0.05)。脾胃濕熱證

10、組與脾虛證組的Bcl-2蛋白表達(dá)均強(qiáng)于正常組(P＜0.05)，而脾胃濕熱證組高于脾虛證組(P＜0.05)，防治組小于脾胃濕熱證組而大于正常組(P＜0.05)。COX-2蛋白表達(dá)，脾胃濕熱證組與脾虛證組均強(qiáng)于正常組(P＜0.05)，而脾胃濕熱證組高于脾虛證組(P＜0.05)，防治組小于脾胃濕熱證組而大于正常組(P＜0.05)。 四、結(jié)論1.脾胃濕熱證的研究大致經(jīng)歷了奠基、萌芽、形成、完善四個(gè)階段，并形成了一套理、法、方、藥較為完善

11、的理論體系。 2.慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃鏡下胃粘膜充血水腫明顯，多伴有糜爛或出血點(diǎn)，胃粘液糊量偏多。病理炎癥顯著強(qiáng)于正常對(duì)照組，與脾虛證組有差異。說(shuō)明脾胃濕熱證具有炎癥病理基礎(chǔ)，處于炎癥活動(dòng)期、早期階段，炎癥反應(yīng)較明顯。 3.HP感染是形成慢性胃炎脾胃濕熱證主要病因之一，HP類似于“濕熱”邪氣。提示“證”、“菌”、“炎”之間存在一定聯(lián)系。 4.脾胃濕熱證胃粘膜炎癥程度與細(xì)胞凋亡增加，兩者無(wú)平行關(guān)系，提示：細(xì)胞凋

12、亡可能是脾胃病虛實(shí)證候的病理生理基礎(chǔ)之一。 5.脾胃濕熱證胃粘膜Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)，與脾虛證有別，說(shuō)明胃粘膜病變過(guò)程中Bcl-2表達(dá)的調(diào)控因證而異。Bcl-2可能是形成同病異證分子調(diào)控基因之一。 6.脾胃濕熱證胃粘膜COX-2蛋白高表達(dá)，且在炎癥部位明顯。這說(shuō)明COX-2可能是形成脾胃濕熱證的炎癥病理機(jī)制之一。 7.脾胃濕熱證的主癥與COX-2變化呈正相關(guān)。提示：COX-2變化可能是中醫(yī)脾胃虛實(shí)證候的分子生物