微囊藻毒素LR對慢性心房顫動患者心房肌SK2通道功能的調(diào)節(jié).pdf

1、目的:心房顫動(Atrial fibrillation，簡稱AF)是臨床上最常見的心律失常，具有很高的發(fā)病率和死亡率。目前對AF發(fā)病機(jī)制的解釋包括“折返”學(xué)說和“驅(qū)動伴顫動樣傳導(dǎo)”理論，以及在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的“肺靜脈波”學(xué)說和“AF致AF”理論。小電導(dǎo)鈣激活鉀通道(small conductance Ca2+-activated K+channels，SK)在哺乳動物心臟中呈心房選擇性表達(dá)，并在心肌動作電位復(fù)極末期起作用。目前研究表明

2、小電導(dǎo)鈣激活鉀通道參與AF的發(fā)生和維持，但其具體作用及機(jī)制仍有爭議。PP2A是SK2通道的組成部分，它對SK2的具有調(diào)節(jié)作用，但這種調(diào)節(jié)作用與SK2通道自身的活動狀態(tài)有關(guān)。本實驗通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察AF患者心房肌細(xì)胞SK2通道電流的改變以及PP2A對SK2通道的調(diào)控，為探討AF發(fā)生機(jī)制與防治方法提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法:利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究心房肌SK2通道電流的改變及在PP1和PP2A抑制劑MC-LR影響下的變化

3、:將19例接受體外循環(huán)手術(shù)患者分為兩組:AF組9例（細(xì)胞n=13），SR組10例（細(xì)胞n=17）。將接受體外循環(huán)手術(shù)患者手術(shù)過程中所切除的右心耳組織保存于氧飽和的Cardioplegic液中，迅速返回實驗室，將組織放入氧飽和的Cardioplegic液中剪為1mm3組織塊后，進(jìn)行兩步酶液（蛋白酶與膠原酶）消化。選取貼壁好，折光性強(qiáng)，立體感好，表面光滑的心房肌細(xì)胞進(jìn)行實驗。將細(xì)胞置于浴液中，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄電流，階躍方波脈沖方案:

4、保持電位(holding potential，HP):-55mV，從-130mV以10mV階躍去極至+50mV，脈沖時程200ms。電流信號通過膜片鉗放大器(Axopatch 200B)放大并由濾波器處理后(1KHz)輸入計算機(jī)，經(jīng)Clampex 10.1軟件采集數(shù)據(jù)，用Clampfit 10.1軟件系統(tǒng)分析數(shù)據(jù)。實驗觀察和比較PP1和PP2A特異性阻斷劑微囊藻毒素LR(Microcystin-LR，MC-LR)和CK2特異性阻斷劑四溴

5、苯三唑(TBB)對SK2通道的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)急性酶分離的心房肌細(xì)胞SK2通道電流基本特性:
　?、偃?xì)胞膜片記錄模式，在-130mV-+50mV之間記錄到心房肌細(xì)胞混合電流呈現(xiàn)出明顯的內(nèi)向整流特征。
　?、谠?130mV鉗制電壓下，SR組與AF組內(nèi)向整流混合電流密度分別為-9.01±1.69pA/pF、-14.95±5.78pA/pF(nSR=8，nAF=6，P＜0.05)，AF組內(nèi)向整流混合電流

6、密度明顯大于SR組。
　?、奂尤隨K2通道特異性阻斷劑Apamin(1×10-7mol/L)，內(nèi)向整流混合電流明顯減小，20min左右電流穩(wěn)定不變。加藥前后電流值相減得到SK2電流，AF組SK2電流密度大于SR組，在-130mV時SR組與AF組SK2通道電流分別為-2.66±0.32pA/pF、-6.37±0.20PA/pF(nSR=4，nAF=4，p＜0.05);SK2通道電流I-V曲線顯示該電流具有內(nèi)向整流特征，AF組SK2通

7、道電流密度明顯大于SR組。
　　(2)蛋白磷酸酶對人心房肌細(xì)胞SK2作用:
　　①全細(xì)胞膜片記錄模式，細(xì)胞經(jīng)MC-LR處理15min后，SR組可被apamin阻斷的電流占混合電流的8.43±0.72％(-130mV，n=3)，未經(jīng)MC-LR預(yù)處理電流抑制20.68±1.95％(-130mV，n=4)。兩組Apamin對電流的抑制作用有明顯差異。
　?、谕瑯拥姆椒ㄓ^察MC-LR作用后AF組SK2通道電流。經(jīng)MC-LR預(yù)處

8、理后AF組心房肌細(xì)胞SK2通道電流密度減小，AF組可被Apamin阻斷的電流占混合電流的20.95±11.36％(-130mV，n=5)，未經(jīng)MC-LR預(yù)處理電流抑制40.26±1.24％(-130mV，n=3,P＜0.05)，Apamin對這兩組電流的抑制作用有明顯差異。
　?、跰C-LR使SR組和AF組SK2通道電流在混合電流中比例下降，抑制比分別為8.43±0.72％、20.95±11.36％(nSR=3，nAF=5，P＜0

9、.05)。
　　(3)CK2對內(nèi)向整流混合電流的影響:全細(xì)胞膜片記錄模式，浴液中加入CK2特異性阻斷劑TBB（10μmol/L、20μmol/L），隨時間延長內(nèi)向混合電流大小無變化。
　　結(jié)論:
　　1.人心房肌細(xì)胞上有SK2通道電流，AF組SK2通道電流較SR組明顯增加，提示SK2通道參與AF的心房電重構(gòu)的過程;
　　2.MC-LR可以使SK2通道電流減小，且對AF組的抑制比例大于SR組，這與AF組SK2通道電