鈣離子激活的氯離子通道在慢性鼻竇炎中對黏蛋白MUC5AC表達(dá)的調(diào)控作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、鈣離子激活的氯離子通道在慢性鼻竇炎中對黏蛋白MUC5AC表達(dá)的調(diào)控作用研究
　　慢性鼻竇炎是影響人類健康的常見疾病,長期大量流膿涕是困擾患者的一大主要癥狀。傳統(tǒng)的治療方法如應(yīng)用抗生素、血管收縮劑、穿刺沖洗等均不能有效改善其長期流膿涕的癥狀。即使通過鼻內(nèi)鏡手術(shù),改善了鼻竇的引流問題,術(shù)后流膿涕的問題仍不能得到有效解決。
　　慢性鼻竇炎長期流膿涕與鼻竇黏膜中粘蛋白(mucin,MUC)的大量分泌有著密切關(guān)系,使其具有“粘液高分泌

2、性疾病”的特點(diǎn)。近年來研究發(fā)現(xiàn),在人呼吸道上皮中鈣離子激活的氯離子通道(calcium-activatiedchloridechainlellCaCC1或HeLCA1)參與促進(jìn)上皮杯狀細(xì)胞增生,增加MUC5AC的合成。在許多具有“粘液高分泌性疾病”特點(diǎn)的下呼吸道疾病中,如慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepuliilorlarydisease,COPD)、哮喘、慢性支氣管炎等,已發(fā)現(xiàn)CaCC1均有特異性的高表達(dá),通過

3、應(yīng)用CaCC1抑制劑尼弗滅酸(niflumicacidNFA),可以有效抑制呼吸道上皮杯狀細(xì)胞再生顆粒的產(chǎn)生和MUC5AC的分泌,對這類疾病具有潛在的治療作用。因此我們設(shè)想在慢性鼻竇炎的病理機(jī)制中,CaCC1可能同樣發(fā)揮重要作用,通過對CaCC1的干預(yù),觀察能否改善其“高黏液素”的病理環(huán)境,從而從新的角度探討解決其長期流膿涕的問題。因此,對CaCC1在慢性鼻竇炎中對黏蛋白MUC5AC表達(dá)的調(diào)控作用的關(guān)系進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究,全文由三部分組成:

4、
　　第一部分，鈣離子激活的氯離子通道與慢性鼻竇炎關(guān)系的研究
　　目的:觀察CaCC1在慢性鼻竇炎和/伴有鼻息肉黏膜中的表達(dá),探討其在慢性鼻竇炎發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:?、裥秃廷蛐吐员歉]炎患者篩竇黏膜各10例,另取10例正常篩竇黏膜作為對照。應(yīng)用Real-timePCR方法檢測各組鼻竇黏膜中CaCC1mRNA表達(dá),應(yīng)用免疫熒光方法觀察CaCC1蛋白在各組鼻竇黏膜中的表達(dá)情況,比較CaCC1蛋白在各組中平均陽性細(xì)

5、胞面積比。
　　結(jié)果:CaCC1mRNA在Ⅰ型和Ⅱ型慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中的表達(dá)明顯高于對照組(P＜0.01),而在兩組慢性鼻竇炎組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Ⅰ型和Ⅱ型慢性鼻竇炎鼻竇黏膜均見杯狀細(xì)胞增生。CaCC1在兩組鼻竇黏膜中均主要表達(dá)于上皮杯狀細(xì)胞,平均陽性細(xì)胞面積比在I型和II型慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),而與對照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:在基因和蛋白

6、水平上,CaCC1在慢性鼻竇炎和/伴有鼻息肉的鼻竇黏膜中均有明顯表達(dá),其在慢性鼻竇炎的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用,可能與上皮杯狀細(xì)胞的增生及粘液高分泌有關(guān)。
　　第二部分，黏蛋白5AC與慢性鼻竇炎關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:觀察MUC5AC在慢性鼻竇炎和/伴有鼻息肉鼻竇黏膜中的表達(dá),探討其在慢性鼻竇炎病理機(jī)制中的作用。
　　方法:實(shí)驗(yàn)分組同第一部分,應(yīng)用real-timePCR方法檢測各組鼻竇黏膜MUC5ACmRNA表達(dá),免

7、疫熒光方法觀察MUC5AC蛋白在各組鼻竇黏膜中的表達(dá),比較MUC5AC蛋白在各組中平均陽性細(xì)胞面積比。
　　結(jié)果:MUC5ACmRNA在Ⅰ型和Ⅱ型型慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中的表達(dá)明顯高于對照組(P＜0.01),而在兩組慢性鼻竇炎組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)MUC5AC在兩組鼻竇黏膜中均主要表達(dá)于上皮杯狀細(xì)胞,平均陽性細(xì)胞面積比在Ⅰ型和Ⅱ型慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),而與對照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、(P＜0.01)。
　　結(jié)論:MUC5AC在慢性鼻竇炎和/伴有鼻息肉的鼻竇黏膜中表達(dá)明顯均增高,MUC5AC在慢性鼻竇炎的發(fā)病過程中可能發(fā)揮重要作用。
　　第三部分，CaCC1在鼻竇粘膜組織培養(yǎng)中對MUC5AC調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:通過對CaCC1不同方式的干預(yù),觀察體外培養(yǎng)的鼻竇粘膜組織中CaCC1及MUC5AC蛋白表達(dá)的變化。
　　方法:取鼻內(nèi)鏡手術(shù)中切除的篩竇黏膜組織5例,采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)24小

9、時(shí),每例組織分為5組,A組:培養(yǎng)液不加任何干預(yù);B組:加入人重組TNF-a10ng/mL;C組:加入NFA(CaCC1抑制劑)10umol/L,30分鐘后,加入人重組TNF-a10ng/mL:D組:加入NFA100umol/L30分鐘后加入人重組TNF-a10ng/mL:E組:加入NFA500umol/L30分鐘后加入人重組TNF-a10ng/ml。以上5組培養(yǎng)24小時(shí)后進(jìn)行WesternBlotting實(shí)驗(yàn),觀察CaCC1及MUC5A