負載吉西他濱的紅細胞載藥系統(tǒng)的建立及體外抗腫瘤作用評價.pdf

1、研究背景:
　　將抗腫瘤藥物通過載體靶向運送至腫瘤組織后再釋放，是降低藥物毒副作用，減少用藥劑量，增強藥物在局部藥效的有效辦法。自體血液中分離的紅細胞有作為藥物載體的潛能，具有較好的安全性、有效性和易耐受性。吉西他濱（2'-脫氧-2'，2'-二氟胞苷），是一種臨床廣泛使用的經(jīng)典化療藥物，常應用于非小細胞肺癌、胰腺癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、膀胱癌、卵巢癌和甲狀腺癌等的治療，尤其在局部晚期或轉(zhuǎn)移性胰腺癌、膀胱癌中。但是，其在臨床使用過程

2、中，仍具有生物利用度低、毒副反應明顯，易產(chǎn)生獲得性耐藥等局限性。
　　研究目的:
　　1、改良已有建立載體紅細胞的方法，通過計算載藥率尋找用載體紅細胞包載吉西他濱的最佳載藥條件。
　　2、評價載藥過程對載體紅細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的影響;評價載吉西他濱紅細胞在體外低溫貯存的穩(wěn)定性;評價載體紅細胞對包載的吉西他濱的緩釋能力。
　　3、以裸藥吉西他濱作為對照組，用人肺腺癌細胞株A549及人胰腺癌細胞株BxPC-3評價載吉西

3、他濱紅細胞的抗腫瘤作用。
　　研究方法:
　　1、用低滲膨脹-高滲再封技術(shù)來建立負載吉西他濱的紅細胞載藥系統(tǒng)，包載過程中設定不同的吉西他濱濃度及再封時間，通過用2種方法計算載體紅細胞對吉西他濱包載率來尋找最佳載藥條件。
　　2、通過對比紅細胞載藥前后的形態(tài)變化及滲透脆性變化來評價載藥過程對紅細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的影響。將載吉西他濱紅細胞的PBS懸液置于4℃環(huán)境中，每天檢測上清液中吉西他濱的藥物濃度，同時觀察紅細胞形態(tài)，評價

4、載吉西他濱紅細胞的貯存穩(wěn)定性。將載吉西他濱紅細胞置于透析袋中，放置在37℃的PBS液中，每間隔一定時間檢測透析袋外液中吉西他濱的藥物濃度，繪制“時間-藥物濃度”曲線，觀察載體紅細胞對包載的吉西他濱的釋放情況。
　　3、用MTT法評價載吉西他濱紅細胞的細胞增殖抑制作用。將不同吉西他濱濃度的載吉西他濱紅細胞作用于人肺腺癌細胞株A549及人胰腺癌細胞株BxPC-3，作用24小時及48小時后測定OD值，計算細胞增殖抑制率，對比同等濃度裸藥

5、吉西他濱作用于A549及BxPC-3細胞24小時及48小時后的細胞增殖抑制率。
　　研究結(jié)果:
　　1、用低滲膨脹-高滲再封的技術(shù)建立負載吉西他濱的紅細胞載藥系統(tǒng)，能獲得的最大載藥率約為73.8％。
　　2、高倍鏡下觀察載吉西他濱前后載體紅細胞的瑞氏染色血細胞涂片，紅細胞形態(tài)無明顯變化，對比載吉西他濱前后載體紅細胞的滲透脆性曲線無統(tǒng)計學差異。載體紅細胞對包載的吉西他濱能穩(wěn)定釋放，48小時后釋放率接近100％。
　

6、　3、載吉西他濱紅細胞作用于A549細胞24小時后對比裸藥吉西他濱組，僅在吉西他濱濃度為780ng/ml時，載吉西他濱紅細胞的細胞增殖抑制作用強于裸藥吉西他濱(P＞0.05);作用48小時后載吉西他濱紅細胞對細胞的增殖抑制作用較裸藥吉西他濱的優(yōu)勢進一步增加，尤其在吉西他濱濃度為780ng/ml時，兩組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。載吉西他濱紅細胞作用于BxPC-3細胞24小時后對比裸藥吉西他濱組，載吉西他濱紅細胞的細胞增殖抑制作用稍

7、強于裸藥吉西他濱;作用48h后載吉西他濱紅細胞對細胞的增殖抑制作用較裸藥吉西他濱的優(yōu)勢進一步增加，尤其在吉西他濱濃度為0.78ng/ml時(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　1、低滲膨脹-高滲再封技術(shù)能建立負載吉西他濱的紅細胞載藥系統(tǒng)，包載率能達到73.8％左右。包載過程對載體紅細胞膜的結(jié)構(gòu)和功能的影響無顯著統(tǒng)計學意義。
　　2、載吉西他濱紅細胞能在4℃環(huán)境中穩(wěn)定保存至少7天。載體紅細胞能在37℃環(huán)境中緩慢釋放包載