甘肅黃芪黃酮類化合物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察甘肅黃芪黃酮單體毛蕊異黃酮(calycosin)，2’-OH-3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖(2’-OH-3，4’-dimethoxyisoflavanone-7-O-β-D-glucopyranoside) 對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用(抗凋亡，內(nèi)分泌功能及RAS系統(tǒng)成員ACE/AE2的表達(dá))。 方法：體外傳代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，建立內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型，分為對(duì)照組，血管緊張素Ⅱ(A

2、ngⅡ)組(1×10<'-6>mol·L<'-1>)，Ang×+2’-OH-3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖組(1μg·mL<'-1>)，AngⅡ+毛蕊異黃酮不同濃度組 (10，1，0.1μg·mL<'-1>)，各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后，采用熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)(LSCM)觀察細(xì)胞的形態(tài)，流式細(xì)胞儀技術(shù)(FCM)探討HUVECs凋亡形態(tài)、凋亡率及凋亡基因Fas的表達(dá)情況；采用放射免疫分析技術(shù)和硝酸還原酶法測

3、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ET，NO；采用免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄集合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測細(xì)胞中ACE/ACE2表達(dá)的變化。 結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，Ang Ⅱ組可促進(jìn)HUVECs凋亡(70.23±4.59 vs 12.48±2.50，P=0.000)，F(xiàn)as蛋白表達(dá)增加(96.43±1.23 vs 17.41±1.52，P=0.000)，激光共聚焦顯微鏡技術(shù)觀察到了典型的凋亡細(xì)胞；毛蕊異黃酮(1μg·mL<'-1>) 及2'-OH-

4、3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖 (1μg·mL<'-1>)可抑制AngⅡ的促HUVECs凋亡作用(分別為：55.99±2.40 vs 70.23±4.59，P=0.001；58.31±2.64 vs70.23±4.59，P=0.002)，并減少了Fas的表達(dá)(分別為：73.73±2.15 vs96.43±1.23，P=0.000；76.63±1.67 vs 96.43±1.23，P=0.000)；同時(shí)毛蕊異黃酮(

5、1μg·mL<'-1>)與2’-OH-3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖 (1μg·mL<'-1>)抑制AngⅡ的促ET-1分泌(分別為：34.96±1.27 vs 60.28±0.93，P=0.000；32.17±8.24 vs 60.28±0.93，P=0.036)，并促進(jìn)了HUVECs NO的釋放(分別為：43.28+4.92 vs 27.96±5.04，P=0.011；42.74±7.21 cs 27.96±

6、5.04，P=0.014)；與正常對(duì)照組比較，AngⅡ可促進(jìn)ACE蛋白(133.44±2.43 W 113.70±3.63，P=0.000)，mRNA的表達(dá)(0.83±0.03 vs 1.32±0.02，P=0.000)，減ACE2表達(dá)(分別為：94.36±+7.88 vs127.47±5.23，P=0.002；0.78±0.04 vs 1.04±0.02，P=0.002)：毛蕊異黃酮可增強(qiáng)ACE2表達(dá)(低、中、高劑量組分別為，蛋白：1

7、14.77±4.43 12S vs 94.36±7.88，P=0.030；127.04±2.38 vs 94.36±7.88，P=0.006；152.01±4.10 vs 94.36±7.88，P=0.001；mRNA：1.02±0.01 vs 0.78±0.04，P=0.000；1.14±0.03 vs 0.78±0.04，P=0.000：1.27±0.02 vs0.78±0.04，P=0.000)，抑制ACE分泌(低、中、高劑量組分

8、別為，蛋白：119.45±2.54vs 133.44±2.43，P=0.001；108.48±5.05 vs 133.44±2.43，P=0.000：95.23±5.34 vs133.44±2.43，P=0.000；mRNA：1.21±0.01 vs 1.32±0.02，P=0.035：1.10±0.01 vs1.32±0.02，P=0.005；1.21±0.01 vs 1.01±0.01，P=0.000)，并呈劑量依賴性；兩種黃芪黃酮

9、單體相同濃度的組間比較，在實(shí)驗(yàn)所測各項(xiàng)指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(兩組間細(xì)胞凋亡率、Fas表達(dá)、ET-1及NO的含量分別為55.99±2.40 vs 58.31±2.64，P=0.396；73.73±2.15 vs 76.63±1.67，P=1.000；34.96±1.27 vs 32.17±8.24，P=0.383；43.28±4.92 vs 42.74±7.21，P=1.000)。 結(jié)論：甘肅黃芪黃酮類化合物通過抑制AngⅡ所致的體