降鈣素基因相關肽與高血壓及吳茱萸次堿的治療作用.pdf

1、研究背景:降鈣素基因相關肽(CGRP)是辣椒素敏感感覺神經(jīng)的主要遞質(zhì)，在外周神經(jīng)系統(tǒng)，背根神經(jīng)節(jié)(DGR)是合成CGRP的主要部位。CGRP隨外周感覺神經(jīng)廣泛分布于心血管組織，是目前己知最強的舒血管物質(zhì)，在維持循環(huán)穩(wěn)定中起重要作用。新近研究發(fā)現(xiàn)，非神經(jīng)組織細胞如淋巴細胞、內(nèi)皮細胞也能合成CGRP，通過自分泌或旁分泌而發(fā)揮作用。CGRP的合成與釋放主要受辣椒素受體(VR1)調(diào)節(jié)CGRP在高血壓的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。原發(fā)性高血壓患者及自發(fā)

2、性高血壓大鼠(SHR)血漿CGRP濃度降低，被認為是血壓升高的重要原因；在繼發(fā)性高血壓患者(如醛固酮增多癥)或兩腎一夾高血壓大鼠(2K1C)，CGRP血漿濃度增高，可能是對抗血壓升高的有益代償。在不同原因引起的高血壓中CGRP濃度差異的原因尚未闡明。 N-花生四烯酸乙醇胺(AEA)是VR1的內(nèi)源性配體，體內(nèi)多種細胞可合成AEA，包括內(nèi)皮細胞、巨噬細胞和單核細胞等。VR1定位于細胞膜內(nèi)側，因此其相應配體需要進入細胞膜內(nèi)才能發(fā)揮作用

3、。血漿或組織液中的AEA進入靶細胞依賴于細胞膜上AEA轉(zhuǎn)運體，現(xiàn)已證明轉(zhuǎn)運體途徑是細胞外AEA進入細胞內(nèi)的主要方式。因此，血漿中AEA水平及AEA轉(zhuǎn)運體活性可能是影響機體CGRP合成與釋放的重要因素。AEA轉(zhuǎn)運體活性可受一氧化氮(NO)及外源性一氧化氮合酶抑制物(L-NAME)影響。 本實驗通過比較分析原發(fā)性高血壓患者與自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)及兩腎一夾高血壓大鼠(2K1C)AEA與CGRP水平變化，并觀察高血壓動物淋巴細胞A

4、EA轉(zhuǎn)運體活性對CGRP合成與釋放的影響及ADMA對AEA轉(zhuǎn)運體活性的影響，以探討AEA轉(zhuǎn)運體活性變化在高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法: 臨床實驗:在未經(jīng)治療原發(fā)性高血壓患者及正常人，測量血壓，測定血漿CGRP及AEA濃度。 動物實驗:在SHR與WKY大鼠(正常對照)，兩腎一夾高血壓大鼠(2K1C)與正常大鼠(假手術處理)比較實驗中，分別測量血壓(尾動脈測壓法)，檢測血漿中CGRP(放射免疫分析法)、AEA(液質(zhì)

5、聯(lián)用法)、非對稱二甲基精氨酸(ADMA)(高效液相色譜法)及一氧化氮(NO)(硝基還原法)；取大鼠背根神經(jīng)節(jié)檢測α-CGRPmRNA及β-CGRPmRNA表達量(熒光定量實時PCR)；檢測AEA轉(zhuǎn)運體攝取活性(同位素標記法)。 細胞實驗:取正常Wistar大鼠外周血淋巴細胞，以熒光定量PCR法檢測AEA對細胞CGRPmRNA合成的影響，并觀察AEA轉(zhuǎn)運體抑制劑AM404對其影響；以同位素標記法檢測ADMA對淋巴細胞轉(zhuǎn)運體活性影響

6、。 結果:原發(fā)性高血壓患者血漿中AEA水平升高，CGRP濃度降低。同樣，SHR血漿AEA水平升高，CGRP濃度降低，DRG中α-CGRPmRNA及β-CGRPmRNA表達量降低；而2K1C血漿AEA水平升高，CGRP濃度升高，DRG中α-CGRPmRNA及β-CGRPmRNA表達量升高。SHR的淋巴細胞AEA轉(zhuǎn)運體攝取活性降低，血漿中ADMA水平升高，NO水平降低；2K1C大鼠AEA轉(zhuǎn)運體攝取活性、ADMA及NO水平無明顯變化。