癌-睪丸抗原OY-TES-1基因重組、表達(dá)及抗體血清學(xué)分析.pdf

1、目的：初步了解Oγ-TES-1在各種組織的表達(dá)及其抗體出現(xiàn)的情況，分析Oγ-TES-1與腫瘤發(fā)生發(fā)展以及其抗體與腫瘤和其它疾病的關(guān)聯(lián)，探討將Oγ-TES-1用于腫瘤免疫治療的可能性。 方法：(1)RT-PCR擴(kuò)增Oγ-TES-lcDNA序列，構(gòu)建Oγ-TES-1原核重組表達(dá)質(zhì)粒，表達(dá)和純化Oγ-TES-1融合蛋白；(2)對Oγ-TES-1進(jìn)行生物信息學(xué)分析；(3)制備Oγ-TES-1多克隆抗體；(4)利用實時定量PCR(aRT-

2、PCR)和免疫組織化學(xué)(IHC)技術(shù)，從mRNA和蛋白質(zhì)兩個水平研究Oγ-TES-1的基因表達(dá)特點；(5)采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測不同腫瘤、肝硬化、不育癥病人及正常人血清中相應(yīng)的抗體，并對其臨床意義做初步的分析。 結(jié)果：(1)通過大腸桿菌成功表達(dá)出融合蛋白麥芽糖結(jié)合蛋白/Oγ-TES-1(MBP/Oγ-TES-1)，對表達(dá)的蛋白行蛋白質(zhì)飛行質(zhì)譜儀鑒定，確定與目的蛋白肽段相符。(2)Oγ-TES-lmRNA在正常組織

3、中廣泛表達(dá)，以睪丸組織中Oγ-TES-1的相對表達(dá)量最高，約為其他正常組織90倍以上；在HCC、腦膜瘤和膠質(zhì)瘤中，Oγ-TES-1mRNA表達(dá)水平明顯高于癌旁組織和對應(yīng)的正常組織，并與腫瘤臨床指標(biāo)無關(guān)。(3)免疫組織化學(xué)(IHC)顯示在所檢測的多種正常組織和細(xì)胞中(10例睪丸組織、8例結(jié)腸、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶狀體、3例外周血白細(xì)胞和l例腎)，除1例腎組織中的腎小管外，其余均未見Oγ-TES-1蛋白陽性反應(yīng)；在非腫瘤病變組

4、織中，1例前列腺炎與2例慢性乙型肝炎均為陰性，4例HCC癌旁的肝硬化組織有l(wèi)例陽性，50％(4/8)不育癥病人睪丸組織呈現(xiàn)Oγ-TES-1蛋白陽性反應(yīng)。HCC、結(jié)腸癌和胃癌中Oγ-TES-1蛋白陽性率分別為40％(4/10)、33.3％(1/3)和25％(4/16)，而7例肺癌組織均為陰性反應(yīng)。(4)血清學(xué)檢測未發(fā)現(xiàn)76例正常人和17例肝硬化病人血清中有相應(yīng)抗體；腫瘤病人血清抗體陽性率為14.9％(56/377)，其中食管癌為30％(3