未成熟樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠小腸移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:一、通過改進(jìn)外科技術(shù),探討建立一種穩(wěn)定和實(shí)用的大鼠異位全小腸移植(SBT)模型方法:三袖套血管吻合法二、參照樹突狀細(xì)胞(DC)經(jīng)典分離誘導(dǎo)方案,從大鼠骨髓分離DC及前體,培養(yǎng)擴(kuò)增未成熟樹突狀細(xì)胞(imDC).三、用培養(yǎng)擴(kuò)增的供者imDC預(yù)處理受者,復(fù)制大鼠SBT模型,術(shù)后觀察受者一般情況及移植腸存活時(shí)間,檢測移植術(shù)后移植腸的排斥反應(yīng)分級.方法:實(shí)驗(yàn)分三部分.一、SBT部分:將60只Wistar大鼠作為受體隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(30只)和

2、對照組(30只),另取60只Wistar大鼠作供體,行Wistar大鼠同系小腸移植.實(shí)驗(yàn)組受體鼠給予三袖套血管吻合法,對照組受體鼠給予經(jīng)典血管吻合法,比較兩組手術(shù)結(jié)果.二、imDC培養(yǎng)部分:采用直接分離誘生法:在經(jīng)典分離誘導(dǎo)方案(GM-CSF+IL-4)的基礎(chǔ)上,培養(yǎng)第5天分成兩組:IL-4組和IL-10組.IL-4組繼續(xù)用經(jīng)典方案培養(yǎng),IL-10組加入IL-10抑制大鼠骨髓來源DC的成熟,制備imDC,光鏡觀察DC形態(tài),用FCM檢測所

3、得DC表型.直接分離誘生法:低滲裂解紅細(xì)胞,特異T、B細(xì)胞單抗、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用破壞T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板等其它雜項(xiàng)細(xì)胞,最后陰性選擇留下DC及前體細(xì)胞,再利用DC的弱粘附性,將DC及前體從血液或骨髓液中分離出來,然后加入細(xì)胞因子培養(yǎng)擴(kuò)增.三、imDC干預(yù)SBT部分:將24只SD大鼠作為受體隨機(jī)分為空白對照組、CsA組、imDC組、CsA+imDC組,每組6只,另取24只Wistar大鼠作供體.空白對照組只行SBT,不作

4、干預(yù)(預(yù)處理);imDC組用培養(yǎng)的Wistar大鼠的imDC預(yù)處理SD大鼠,CsA組用CsA預(yù)處理SD大鼠,imDC+CsA組用CsA預(yù)處理SD大鼠,行同種異體SBT移植,術(shù)后觀察受體鼠一般情況及移植腸存活時(shí)間,術(shù)后第3、5、7天分別取移植小腸粘膜行組織病理檢查.結(jié)論:一、三袖套法血管吻合法行大鼠異位SBT操作簡便、并發(fā)癥少,受體動靜脈吻合時(shí)間、移植腸溫缺血時(shí)間及受體手術(shù)時(shí)間明顯縮短,是一種良好的研究SBT的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?二、直接分離誘生法