三拗湯類方及成分對(duì)病毒性哮喘作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分Hep-2細(xì)胞對(duì)呼吸道合胞病毒的敏感性的測(cè)定
　　 目的：檢測(cè)人喉癌上皮細(xì)胞(Hep-2)對(duì)呼吸道合胞病毒(RSV)的敏感性。方法：采用RSV接種Hep-2，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)出現(xiàn)的時(shí)間、病變完全的時(shí)間及病變特征；采用直接免疫熒光(DFA)法測(cè)定病毒抗原表達(dá)，間接反映細(xì)胞中病毒含量。結(jié)果：接種病毒后，Hep-2細(xì)胞第2天出現(xiàn)病變，第3天病變完全，且可見明顯的合胞體形成。DFA檢測(cè)結(jié)果顯示，Hep-2細(xì)胞熒光強(qiáng)度很

2、強(qiáng)(()～())，間接反映出RSV在Hep-2細(xì)胞中表達(dá)很高。結(jié)論：Hep-2細(xì)胞對(duì)RSV敏感性較高，并且其CPE具有明顯的形態(tài)特征，是一種比較適合用于擴(kuò)增、分離RSV的細(xì)胞。
　　 第二部分呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)致敏小鼠建立病毒性哮喘模型及病理生理特征
　　 目的：評(píng)價(jià)用呼吸道合胞病毒(RSV)誘導(dǎo)雞卵白蛋白(OVA)致敏，建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法：Balb/C小鼠100只，隨機(jī)分為磷酸鹽緩沖液(PBS

3、)對(duì)照組、OVA/RSV組、PBS/RSV組、RSV/RSV組和OVA/PBS組5組。應(yīng)用OVA多點(diǎn)注射致敏、OVA氣道霧化吸入結(jié)合RSV滴鼻激發(fā)復(fù)制急性病毒性哮喘模型。觀察小鼠哮喘急性發(fā)作癥狀；動(dòng)物體描箱法測(cè)定乙酰膽堿(Ach)激發(fā)條件下氣道反應(yīng)性(以肺阻力RL表示)；支氣管肺泡灌洗液(BALF)作細(xì)胞分類計(jì)數(shù)；蘇木精一伊圣工(HE)染色觀察肺組織病理變化。結(jié)果：①以45、135、405μg/mL Ach濃度激發(fā)時(shí)，與其他各組比較，O

4、VA/RSV組RL均顯著升高(P均<0.01)。②BALF中炎性細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，與其他各組比較，OVA/RSV組的細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞均顯著升高(P均<0.01).③OVA/RSV組的肺組織病變程度重于其他各組(P均<0.01)。
　　 結(jié)論：RSV誘導(dǎo)OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的。
　　 第三部分呼吸道合胞病毒對(duì)致敏小鼠氣道炎癥及Th1/Th2亞群平衡性的影響
　　

5、目的：觀察呼吸道合胞病毒(RSV)對(duì)致敏小鼠氣道炎癥及Th1/Th2亞群平衡性變化的影響.方法：Balb/C小鼠100只，隨機(jī)分為PBS對(duì)照組、OVA/RSV組、RSV/RSV組和OVA/PBS組5組。應(yīng)用OVA多點(diǎn)注射致敏、OVA氣道霧化吸入結(jié)合RSV滴鼻激發(fā)復(fù)制急性病毒性哮喘模型。BALF作細(xì)胞分類計(jì)數(shù)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定BALF上清中白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-5、干擾素(IFN)-γ含量；HE染色觀察肺病理變化

6、。結(jié)果：①BALF中炎性細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，與其他各組比較，OVA/RSV組的細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞均顯著升高(P均<0.01)。②BALF上清中各細(xì)胞因子水平，與PBS對(duì)照組比較，RSV/PBS組、RSV/RSV組的IFN-γ均升高，其中RSV/RSV組的升高更明顯(P均<0.01)；OVA/PBS組則是IL-4、IL-5含量增加更為明顯(P均<0.01).OVA/RSV組IFN-γ、IL-4、IL-5的含量均較其它各

7、模型組顯著增加(P均<0.01)。③OVA/RSV組的肺組織病變程度重于其他各組(P均<0.01)。結(jié)論：OVA致敏小鼠RSV感染后可明顯加重氣道炎癥，Th1、Th2型炎癥均加強(qiáng)，且以Th2型炎癥加重為主。
　　 第四部分三拗湯類方及成分對(duì)呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的致敏小鼠作用研究
　　 目的：觀察三拗湯類方及成分對(duì)呼吸道合胞病毒(RSV)誘導(dǎo)的哮喘小鼠氣道炎癥和Th1/Th2亞群平衡性的影響，比較各方的作用效果，篩選出最佳對(duì)

8、癥方劑。方法：在對(duì)三拗湯類方的研究中，Balb/C小鼠隨機(jī)分為11組，每組20只，分別為PBS對(duì)照組，OVA/RSV組，DM組，SAD-S組，SAD-L組，ACPI-S組，ACPI-L組，ACP II-S組，ACP II-L組，ACPIII-S組，ACPIII-L組；在對(duì)三拗湯類方的成分的研究中，Balb/C小鼠隨機(jī)分為11組，每組20只，分別為PBS對(duì)照組，OVA/RSV組，DM組，SAD-VO組，SAD-AE組，ACPI-VO組，A

9、CPI-AE組，ACPII-VO組，ACPII-AE組，ACPIII-VO組，ACPIII-AE組。應(yīng)用OVA多點(diǎn)注射致敏、OVA氣道霧化吸入結(jié)合RSV滴鼻激發(fā)復(fù)制急性病毒性哮喘模型。動(dòng)物體描箱法測(cè)定Ach激發(fā)條件下氣道反應(yīng)性(RL)；BALF作細(xì)胞分類計(jì)數(shù)；ELISA法測(cè)定BALF上清中IL-4、IL-5、IFN-γ含量；HE染色觀察肺病理變化。結(jié)果：以45、135，405μg/mL Ach濃度激發(fā)時(shí)，與PBS對(duì)照組比，OVA/RSV

10、組RL增高值(與基值比較)均明顯升高(P<05，P<0.01)；BALF中細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞炎性細(xì)胞均顯著升高(P均<0.01)；BALF上清夜中IFN-γ及IL-4、IL-5含量均升高(P<0.01)，其中IL-4、IL-5含量升高更為明顯(P均<0.01)；OVA/RSV組的肺組織病變程度十分嚴(yán)重(P均<0.01).應(yīng)用藥物后氣道反應(yīng)性均顯著降低(P<0.05，P<0.01)；各給藥組細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞、淋

11、巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量與OVA/RSV組比均明顯降低(P均<0.01)，其中中性粒細(xì)胞降低更為顯著(P均<0.01)；各給藥組IFN-γ，IL-4、IL-5的含量均較OVA/RSV組明顯降低(P<0.05，P<0.01)；藥物應(yīng)用后能減輕支氣管周圍炎的病變程度；其中ACPIII對(duì)各種指證哮喘的指標(biāo)均有較強(qiáng)的抑制作用。通過對(duì)ACPIII成分的進(jìn)一步研究分析，ACPIII-VO、ACPIII-AE均使中性粒細(xì)胞顯著降低，ACPIII-VO