肺癌95D與95C細胞株中轉移相關miRNAs的篩選研究.pdf

1、背景：肺癌是目前全球最常見、疾病負擔最重的惡性腫瘤。影響肺癌患者治療效果和預后的關鍵因素是肺癌的侵襲與轉移。轉移是一個多因素，多階段，連續(xù)的生物過程。它的發(fā)生經(jīng)過一系列步驟：從原位侵襲開始，接著腫瘤細胞進入血管或淋巴管，在循環(huán)中存活，出血管或淋巴管，在遠處開始并維持微小轉移灶，最后經(jīng)過血管化作用并增殖形成轉移腫瘤。目前研究認為細胞外基質、細胞粘附分子、水解蛋白酶、血管形成的相關分子、轉移相關基因及miRNAs等均與腫瘤轉移密切相關，這些

2、細胞因子及基因相互影響和制約，影響腫瘤細胞轉移的進程。微小RNA(microRNA，簡稱miRNA)是一類長度約19-24核苷酸的單鏈非編碼RNA。目前研究表明miRNAs廣泛參與生物的生理和病理學過程，在細胞分化、增殖、凋亡、新陳代謝、感染，尤其是腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等生物學過程都發(fā)揮了重要作用。而轉移作為腫瘤的重要生物學特征，其與miRNAs的研究也引起了科學家們的廣泛關注。研究報道m(xù)iRNAs在乳腺癌，肝癌，胃癌，甲狀腺癌等腫瘤轉移過

3、程發(fā)揮了重要作用，但是miRNAs與肺癌轉移的相關研究還比較少。本研究擬使用miRNA芯片對不同轉移能力肺癌細胞株進行篩選，以找到與肺癌轉移相關的miRNAs，為進一步研究miRNAs在肺癌轉移機制等研究奠定基礎。
　　 目的：采用microRNA芯片篩選出肺癌高轉移能力95d細胞和低轉移能力細胞95c細胞差異表達的miRNAs。
　　 方法：常規(guī)培養(yǎng)肺癌95d及95c細胞株，取等量95d及95c細胞，用Trizol法分

4、別提取兩種細胞的總RNA；用PEG方法分離miRNA，使用T4 RNA連接酶標記方法標記CU-cy3，然后進行miRNA芯片雜交與清洗，芯片掃描，采用LuxScan3.0圖像分析軟件對芯片圖像進行分析，把圖像信號轉化為數(shù)字信號；再根據(jù)各張芯片的global mean進行片間校正，最后用Significance Analysis of Microarrays(SAM，version2.1)挑選差異表達基因。
　　 結果：miRNA

5、芯片結果顯示，95D細胞相對于95C細胞上調的miRNA有22個：hsa-miR-138-2*,hsa-miR-487a,hsa-miR-151-5p,hsa-miR-125a-3p,hsa-miR-220b,hsa-miR-1229,hsa-miR-125a-5p,hsa-miR-1290,hsa-miR-18a, mmu-miR-1195,hsa-miR-487b,hsa-miR-652,hsa-miR-1285,mmu-miR-7

6、00,hsa-miR-663，hsa-let-7g，hsa-miR-222，預測的miRNA有MIR232，MIR196，MIR237，MIR189，MIR191；表達下調的有：mmu-miR-220,hsa-miR-5481。
　　 結論：⑴miRNA在肺癌高轉移能力95d細胞株和低轉移能力95c細胞株中存在差異表達miRNAs。⑵肺癌高轉移能力95d細胞株中表達上調的22條miRNAs可能促進肺癌轉移，表達下調的2條miRN