異鼠李素抗腫瘤作用及其機(jī)理的研究.pdf

1、目的:從誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化和凋亡,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖等方面對(duì)異鼠李素的抗腫瘤的作用及機(jī)制進(jìn)行研究;采用現(xiàn)代時(shí)間生物學(xué)理論及其研究方法探討腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)和與增殖有關(guān)的酶活性的時(shí)間特征,找出異鼠李素藥物毒性反應(yīng)最低、療效作用最高的時(shí)間規(guī)律,為異鼠李素在臨床上擇時(shí)治療提供理論基礎(chǔ).方法與結(jié)果:1.利用MTT法測(cè)定異鼠李素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制、光鏡下計(jì)數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、光鏡和電子顯微鏡對(duì)細(xì)胞形態(tài)觀察、克隆形成和3H-TdR摻入分析,基因組DNA

2、片段分析、流式細(xì)胞術(shù)等方法研究異鼠李素對(duì)HeLa、Tca-8113、YTLMC-90、Eca-109細(xì)胞增殖和凋亡的作用.2.為了進(jìn)一步證實(shí)異鼠李素的抑癌抗癌作用,對(duì)其抑制腫瘤生長(zhǎng)增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究.用TRAP-PCR法檢測(cè)異鼠李素處理后對(duì)人癌細(xì)胞端粒酶活性的影響;檢測(cè)過氧化氫酶活性;免疫組化方法測(cè)定PCNA表達(dá)的變化;流式細(xì)胞術(shù)方法研究異鼠李素處理腫瘤細(xì)胞后對(duì)腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的影響;用流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光法

3、檢測(cè)異鼠李素處理前后抑制分化因子Id-1表達(dá).3.觀察異鼠李素對(duì)鼠移植瘤的抑制作用.以鼠Lewis肺癌細(xì)胞復(fù)制C57BL/6移植瘤模型,鼠隨機(jī)分組用藥,對(duì)照組、異鼠李素組、異鼠李素提前灌胃組、順鉑組.用藥7天后收集標(biāo)本,采用光鏡、電鏡觀察,免疫組化分析PCNA、bcl-2、bax的表達(dá).4.為了探討人食道癌Eca-109細(xì)胞DNA合成與c-myc基因表達(dá)的近日節(jié)律以及異鼠李素對(duì)二者的影響作用,達(dá)到有效治療腫瘤的目的,我們用3H-TdR摻