促腎上腺皮質激素與轉化生長因子β1對足細胞表型的影響.pdf

1、目的：分別觀察促腎上腺皮質激素（ACTH1-24和ACTH4-10）和轉化生長因子β1(TGF-β1)對正常足細胞裂孔膜蛋白分子podocin核酸水平，纖維連接蛋白(fibronectin,FN)和平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)蛋白水平的影響，以期能夠探討ACTH1-24和ACTH4-10對腎臟足細胞表型的影響以及預防性保護機制，并明確在預防性保護TGF-β1對正常腎臟足細胞的損傷方面，ACTHl-

2、24和ACTH4-10發(fā)揮的作用是否相似。
　　 方法：1．細胞培養(yǎng)：根據(jù)文獻[l]將復蘇的條件永生型小鼠足細胞系MPC5細胞，于33℃中增殖培養(yǎng)，平均3～4d達80％以上融合傳代，更換于37℃中培養(yǎng)，平均10～14d分化為成熟，此時為分化態(tài)MPC5，觀察正常狀態(tài)下足細胞的形態(tài)，細胞狀態(tài)良好時可以用于實驗；將細胞接種于六孔板，試驗前用無血清RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞生長狀態(tài)，使細胞同步化。
　　 2．細胞分組：將細胞

3、分為ACTHl-24預防實驗組和ACTH4-10預防實驗組，ACTH1-24處理組和ACTH4-10處理組又分別分為A，B兩組，A組：預先加入ACTH1-24(或ACTH4-10)處理1h，后加入TGF-β1處理24h；B組：預先加入ACTH1-24(或ACTH4-10)處理1h，后加入TGF-β1處理48h。根據(jù)文獻[2,3]，ACTH1-24分別設低濃度(75ng／m1)、中濃度(150ng／m1)、高濃度(300ng／m1)三種濃

4、度刺激足細胞；ACTH4-10亦分別設低濃度(1ng／m1)、中濃度(10ng／m1)、高濃度(100ng／m1)三種濃度刺激足細胞；根據(jù)文獻[4]，選取2ng／ml為TGF-βl處理足細胞濃度，刺激時間為24h與48h。
　　 3．檢測指標：足細胞裂孔膜蛋白分子podocinmRNA表達水平，纖維連接蛋白(FN)和平滑肌肌動蛋白(α-SMA)蛋白表達水平。
　　 結果：ACTH1-24預防實驗組：與對照組相比，TGF-

5、βl處理組的podocin的核酸表達水平明顯降低，降低約54．9％；FN的蛋白表達水平明顯升高，升高約2．3倍；α-SMA的蛋白表達水平明顯升高，升高約2．4倍。與對照組相比，ACTH1-24處理組的podocin的核酸表達水平升高，升高約7．5％；FN的蛋白表達水平降低，降低約0．1％；α-SMA的蛋白表達水平升高，升高約1.7％。與對照組相比，ACTH1-24低、中、高三種濃度與TGF-β1處理組podocin的核酸表達水平呈現(xiàn)上升

6、趨勢，分別升高1.3倍、2.4倍、1.2倍；而與TGF-β1處理組相比，F(xiàn)N的蛋白表達水平呈現(xiàn)下降趨勢，分別下降0.1%、7.3%、40.1%：與TGF-β1處理組相比，ACTH1－24低、中濃度與TGF-β1處理組X-SMA的蛋白表達水平呈現(xiàn)上升趨勢，分別升高約4.5%，11.8%；ACTH1-24高濃度與TGF-1處理組x-SMA的蛋白表達水平降低，降低約22.4%。
　　 ACTH4-10預防實驗組：與對照組相比，TGF-

7、βi處理組的podocin的核酸表達水平明顯降低，降低約57.g%;FN的蛋白表達水平明顯升高，升高約18.6倍；x-SMA的蛋白表達水平明顯升高，升高約90.6%。與對照組相比，ACTH4-10處理組的podocin的核酸表達水平升高，升高約8.3%;FN的蛋白表達水平升高，升高約4.8%;x-SMA的蛋白表達水平升高，升高約28.g%。與對照組相比，ACTH4-10低、中、高三種濃度與TGF-β1處理組podocin的核酸表達水平呈

8、現(xiàn)上升趨勢，分別升高5.5%，64.3%，1.7倍；而與TGF-β1處理組相比，ACTH4-10低、中濃度與TGF-β1處理組FN的蛋白表達水平呈現(xiàn)上升趨勢，分別升高約8.8%，9.2%；ACTH4-10高濃度與TGF-β1處理組FN的蛋白表達水平降低，降低約13.1%；與TGF-β1處理組相比，ACTH4-10低濃度與TGF-β1處理組x-SMA的蛋白表達水平升高，升高約3.8%;ACTH4-10中、高濃度與TGF-β1處理組x-SM

9、A的蛋白表達水平呈現(xiàn)下降趨勢，分別降低約5.6%,35.5%。
　　 結論:ACTH1-24與ACTH4-10都可以直接作用于足細胞，穩(wěn)定足細胞裂孔膜蛋白分子podocin的表達，從而維持裂孔隔膜(SD)結構和功能的完整，同時，ACTHl-24可以抑制細胞外基質成分纖維連接蛋白(FN)以及平滑肌肌動蛋白(x-SMA)的升高，從而拮抗TGF-β1對足細胞的表型改變，發(fā)揮保護足細胞的作用。在拮抗TGF-β1導致的足細胞表型改變以及對