卵巢儲備功能下降年輕女性顆粒細胞Gremlin1的表達及其機制研究.pdf

1、目的:檢測卵巢儲備功能降低女性顆粒細胞Gremlin1（GREM1）mRNA表達水平，分析Gremlin表達量與體外受精與胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)結(jié)局的關(guān)系，并進一步探討GREM1參與調(diào)控卵丘顆粒細胞擴展從而影響卵巢儲備功能。
　　方法:選取2013年9月-2014年01月在浙江大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院生殖中心因輸卵管因素不孕而行常規(guī)IVF治療的不孕癥患者44

2、例，年齡20-37歲。取卵當日收集患者取卵當日靜脈血，酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清抗苗勒管激素(anti Mulerianhormone，AMH)水平。卵巢儲備功能下降組的納入標準是:1.血清抗苗勒管激素（anti Mulerian hormone，AMH）＜1.1ng/ml;2.基礎(chǔ)卵泡刺激素(follicle stimulatinghormone，F(xiàn)SH＞10IU/L;3.基礎(chǔ)雌二醇(estradiol，E2≥80pg/ml)且竇卵泡數(shù)

3、(antralfollicle number，AFC)≤5。符合上述3條中的1條。卵巢儲備功能正常組的納入標準是:1.AMH＞2.0ng/ml;2.基礎(chǔ)FSH＜10IU/L;3.基礎(chǔ)E2＜80pg/ml且基礎(chǔ)AFC＞5。同時符合上述3條。留取取卵當日所有的卵泡穿刺液用Fiocll梯度離心法分離顆粒細胞，采用定量Real-time PCR檢測卵巢儲備功能降低患者顆粒細胞GREM1mRNA的表達量及與卵丘顆粒細胞擴展相關(guān)的hyalurona

4、n synthase2(HAS2)、tumornecrosis factor alpha-induced protein6(TNFAIP6)、 pentraxin3(PTX3)和prostaglandin synthase2(PTGS2)的mRNA表達，詳細記錄患者臨床一般資料及使用促性腺激素的累計劑量、卵泡數(shù)、獲卵數(shù)、受精率、卵裂率及胚胎移植情況，并隨訪患者妊娠情況。在體外實驗中，在KGN細胞的培養(yǎng)基中加入卵泡刺激素(follicle

5、-stimulating hormone，F(xiàn)SH)和重組人Gremlin蛋白，分別作用0小時、4小時、6小時和24小時，用定量Real-time PCR檢測HAS2、TNFAIP6、PTX3和PTGS2的mRNA表達量。引入SMAD2/3信號通路抑制劑SB431542，與FSH和重組人Gremlin蛋白共同作用于KGN細胞，檢測抑制劑SB431542對HAS2、TNFAIP6、PTX3和PTGS2的表達量的影響。所有數(shù)據(jù)用SPSS16.

6、0 for windows軟件包進行統(tǒng)計學處理。
　　結(jié)果:1.卵巢儲備功能降低患者顆粒細胞GREM1 mRNA表達水平顯著低于卵巢儲備功能正常者;2.顆粒細胞GREM1 mRNA表達水平與基礎(chǔ)FSH及FSH/LH負相關(guān)(p＜0.05);3.卵巢儲備功能降低患者顆粒細胞HAS2、TNFAIP6、PTX3和PTGS2的mRNA表達水平顯著低于卵巢儲備功能正常者;4.在KGN細胞培養(yǎng)基中加入重組人Gremlin可顯著提高HAS2、TN

7、FAIP6、PTX3和PTGS2的mRNA表達水平，且具有時間依賴性，4小時或6小時時表達都顯著上升;6.在培養(yǎng)基中同時加入SB431542后，HAS2的mRNA表達水平下降，而TNFAIP6和PTGS2的mRNA表達水平?jīng)]有顯著變化。
　　結(jié)論:1.顆粒細胞GREM1表達水平下降與年輕女性卵巢儲備功能降低相關(guān);2.顆粒細胞GREM1 mRNA表達水平與基礎(chǔ)FSH及FSH/LH負相關(guān);3.卵巢儲備功能下降的患者卵丘顆粒細胞擴展過程