前列腺癌特異性分子探針的構(gòu)建及其活體MR成像實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞系，建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型，探討PSCA在其中的表達(dá)及其意義；
　　2.應(yīng)用納米金磁微粒標(biāo)記抗人PSCA單抗7F5，構(gòu)建前列腺癌特異性MR分子探針7F5@GoldMag，檢測(cè)其與前列腺癌細(xì)胞結(jié)合的特異性；
　　3.探討7F5@GoldMag用于體外、體內(nèi)MR顯像的可行性及其在PCa特異性診斷中的價(jià)值和意義。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)人前列腺癌細(xì)胞系LNCaP、PC-3和人

2、肝癌細(xì)胞系SMMC-7721，建立荷瘤裸鼠模型，利用免疫組織化學(xué)，間接免疫熒光，免疫細(xì)胞化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)和western blotting等方法，檢測(cè)PSCA在體外培養(yǎng)的前列腺癌細(xì)胞系及荷瘤裸鼠腫瘤中的表達(dá)。
　　2.將金磁微粒作為MR對(duì)比劑標(biāo)記7F5，應(yīng)用非共價(jià)鍵偶聯(lián)方法構(gòu)建前列腺癌特異性MR分子探針7F5@GoldMag，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察，流式細(xì)胞術(shù)，透射電鏡觀察等方法，檢測(cè)探針與前列腺癌細(xì)胞結(jié)合的特異性。
　　

3、3.利用臨床應(yīng)用的3.0T磁共振掃描儀建立MR掃描序列，觀察不同濃度的金磁微粒MR成像情況，探討MR可分辨的最低濃度；研究探針用于特異性體外細(xì)胞成像的可行性；對(duì)荷瘤裸鼠經(jīng)尾靜脈注射7F5@GoldMag，分別在注射前、注射后6h、12h和24h行MR掃描，觀察其對(duì)腫瘤T2WI信號(hào)的影響，探討其用于體內(nèi)腫瘤MR成像的可行性。
　　結(jié)果：
　　1.人前列腺癌細(xì)胞系LNCaP、PC-3及人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721呈單層貼壁生長(zhǎng)

4、；LNCaP細(xì)胞成瘤率12.5％(1/8)；PC-3和SMMC-7721細(xì)胞成瘤率100％(8/8)；免疫細(xì)胞化學(xué)染色、間接免疫熒光、Western-blot及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果證實(shí)LNCaP、PC-3細(xì)胞表達(dá)PSCA；SMMC-7721細(xì)胞不表達(dá)PSCA；荷瘤裸鼠組織的免疫組織化學(xué)染色證實(shí)了類(lèi)似結(jié)果。
　　2.成功構(gòu)建了前列腺癌特異性MR分子探針7F5@GoldMag；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果7F5@GoldMag與LNCaP及PC-

5、3細(xì)胞結(jié)合率分別為85.2％和92.1％，而與SMMC-7721細(xì)胞結(jié)合率為4.2％，無(wú)關(guān)抗體@GoldMag組三種細(xì)胞均為陰性；激光共聚焦顯微鏡觀察見(jiàn)LNCaP和PC-3細(xì)胞與7F5@GoldMag有特異性結(jié)合，紅色熒光位于細(xì)胞膜，SMMC-7721細(xì)胞的胞膜未見(jiàn)紅色熒光，無(wú)關(guān)抗體組各細(xì)胞系均為陰性；透射電鏡觀察LNCaP及PC-3靠近細(xì)胞膜可見(jiàn)多個(gè)直徑約50nm的團(tuán)塊狀致密電子密度顆粒聚集，SMMC-7721細(xì)胞表面未見(jiàn)致密電子密度

6、顆粒，無(wú)關(guān)抗體@GoldMag組各細(xì)胞系均僅個(gè)別視野見(jiàn)少量致密電子密度顆粒，且距離細(xì)胞膜較遠(yuǎn)。
　　3.GoldMagTM-CS稀釋至1:640與1％瓊脂糖凝膠相比，T2WI序列信號(hào)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；利用7F5@GoldMag標(biāo)記不同細(xì)胞系行MR掃描結(jié)果提示，7F5@GoldMag可顯著降低LNCaP和PC-3細(xì)胞T2WI信號(hào)，而對(duì)SMMC-7721MR信號(hào)無(wú)顯著影響。非特異抗體偶聯(lián)的GoldMag對(duì)三種細(xì)胞MR信號(hào)均無(wú)顯著影

7、響。
　　4.荷瘤裸鼠MR顯像結(jié)果，PC-3荷瘤裸鼠注射7F5@GoldMag6h、12h和24h后腫瘤組織T2WI信號(hào)強(qiáng)度較平掃顯著降低（ANOVA，F(xiàn)=43.675，p=0.000）；注射探針后12h較6h信號(hào)強(qiáng)度有進(jìn)一步降低（p=0.001）；注射后12h和24h腫瘤信號(hào)強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.145）。而SMMC-7721+7F5@GoldMag、PC-3+無(wú)關(guān)抗體@GoldMag和SMMC-7721+無(wú)關(guān)抗體@Go