鉛暴露對大鼠銅相關(guān)蛋白影響的實驗研究.pdf

1、目的：本研究通過建立鉛染毒大鼠時間-效應(yīng)模型，探討鉛暴露對銅穩(wěn)態(tài)相關(guān)指標包括銅的分布（血清銅、組織銅、血清中未結(jié)合銅含量）；銅蛋白酶（單胺氧化酶MAO-B含量、銅藍蛋白 CP活性、Cu/ZnSOD活性）、銅伴侶蛋白（CCS、COX17和ATX1的含量）在鉛暴露致神經(jīng)損傷中的變化，為鉛神經(jīng)損傷的標志物的探討提供依據(jù)。
　　方法：健康雄性 SD大鼠64只，體重180～220g，隨機分為對照組和鉛染毒組，對照大鼠自由含有0.05％醋酸鈉

2、的飲水，鉛染毒組大鼠飲用含有0.05%醋酸鉛的飲水。在染毒后第2、4、6、8周分別處死對照組和鉛染毒組大鼠各8只，用于相應(yīng)的實驗。每日觀察大鼠精神狀態(tài)、活動量、飲食多少等情況。在染毒2、4、6、8周時進行神經(jīng)功能測試，包括感覺功能測試如甩尾實驗、運動功能測試如后肢撐力實驗、學(xué)習(xí)記憶功能測試如水迷宮實驗和步態(tài)評分。應(yīng)用ICP-MS檢測大鼠血清、腦脊液、骨股、皮質(zhì)、脈絡(luò)叢、海馬中鉛、銅的含量。應(yīng)用 ELISA或試劑盒方法檢測大鼠血清、海馬中

3、銅相關(guān)蛋白超氧化物歧化酶 Cu/ZnSOD、銅藍蛋白 CP的活性以及單胺氧化酶 MAO-B的含量。應(yīng)用 ELISA方法檢測大鼠血清、海馬中銅伴侶蛋白 CCS、COX17和ATOX1的蛋白表達。應(yīng)用 real-time PCR的方法進行海馬中 CCS、COX17和ATOX1 mRNA表達的變化的檢測。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，兩組間均數(shù)比較用成組 t檢驗，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析（

4、One Way ANOVA）和兩兩比較的LSD檢驗，P<0.05說明有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：1、鉛暴露不同時間后對大鼠神經(jīng)行為狀況的影響：與對照組比較，鉛暴露組第4周開始直至第8周，大鼠甩尾時間隨時間推移有明顯延長趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；鉛暴露組大鼠后肢展開間距均有增大趨勢；鉛暴露組大鼠第4周、6周、8周第三天潛伏期分別是其對照組的1.41倍、1.64倍、2.34倍，且隨著染毒時間的延長，鉛染毒組的潛伏期增加。同

5、時各染毒組穿越平臺的次數(shù)均減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2、鉛染毒大鼠不同組織中鉛的蓄積：大鼠鉛染毒不同時間后，血清、海馬中鉛的水平均呈上升趨勢，同時，實驗組大鼠血清、皮質(zhì)、海馬、腦脊液、脈絡(luò)叢、骨骼中鉛的含量隨染毒時間的增加而呈上升趨勢。3、鉛暴露對大鼠不同組織中銅水平的影響：鉛暴露不同時間后，大鼠血清和海馬中銅的含量均增多，同時，鉛染毒組大鼠血清、海馬中銅的水平隨鉛暴露時間的增長而呈上升趨勢。4、鉛暴露對大鼠海馬和血清中銅

6、蛋白酶的影響：鉛暴露組大鼠海馬中MAO-B含量在染毒后第2周增加，但在染毒第4、6和8周后，MAO-B含量比對照組分別降低了4.69%、31.73%和40.09%(P<0.05)；同樣，CP活性也分別降低了52.24%、55.13%和70.83%。 Cu/Zn-SOD活性分別降低了16.64%、21.22%和35.79%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而大鼠染鉛2和4周后，血清中MAO-B含量高于對照組，從6周到8周又逐漸減少；而鉛

7、暴露組大鼠血清中 CP、Cu/Zn-SOD的活力降低，并隨著染毒時間的延長而下降(P<0.05)。5、鉛暴露對大鼠海馬和血清中銅伴侶蛋白的影響：鉛暴露2周后，大鼠海馬中 CCS含量開始下降，并一直持續(xù)到染毒結(jié)束。而鉛暴露組海馬COX17、ATOX1含量均高于對照組，在鉛染毒8周后，大鼠海馬中 COX17、ATOX1含量分別增加了9.21%和44.59%(P<0.05)。但是，鉛暴露2和4周后，大鼠血清中 CCS、COX17含量增加，之后

8、又下降，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；鉛暴露2、4、6、8周后，大鼠血清中ATOX1含量分別是對照組的1.2倍、1.44倍、1.56倍和1.62倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。6鉛暴露對海馬中銅伴侶蛋白 mRNA表達的影響：與對照組比較，鉛暴露組海馬中CCS、COX17和ATOX1的mRNA的表達均上升，如鉛染毒組第6周的CCS、COX17、ATOX1的mRNA的表達分別是對照組的2.07倍、1.91倍、1.98倍