豚鼠Oddi括約肌的可能調(diào)控機制.pdf

1、Oddi括約肌(sphincterofoddi，SO)是控制膽汁排出膽道的唯一門戶，對膽囊充盈，膽汁排出及膽道系統(tǒng)正常壓力的維持等具有重要作用。Oddi括約肌功能障礙(sphincterofoddidysfunction，SOD)是臨床上的常見病和多發(fā)病。因此，闡明SO運動調(diào)控機制，對于臨床理解膽道系統(tǒng)疾病的病理生理和相關(guān)疾病的治療具有重要意義。 近年研究表明胃腸道自主節(jié)律性運動起搏細胞——Cajal細胞(interstitia

2、lcellsofCajal，ICC)或Cajal樣細胞(interstitialCajal-likecells)不僅存在于胃腸道內(nèi)，而且亦存在于消化道以外具有自主節(jié)律性運動功能的器官。生理狀態(tài)下，SO具有一定的自主節(jié)律性運動的特性，但SO內(nèi)是否存在ICC尚未見文獻報道。 腸神經(jīng)系統(tǒng)(entericnervoussystem，ENS)對SO具有重要的調(diào)節(jié)作用。其中，膽堿能和腎上腺素能神經(jīng)對SO功能調(diào)控的研究較多，但ENS的主要組成

3、成分之一的非腎上腺素、非膽堿能(nonadrenergic-noncholinergic，NANC)神經(jīng)對SO的作用研究相對較少。已經(jīng)明確NANC神經(jīng)遞質(zhì)之一的一氧化氮(nitricoxide，NO)對胃腸平滑肌具有較強的抑制作用，據(jù)報道這種作用可能是ICC介導(dǎo)的。生理實驗研究發(fā)現(xiàn)，NO對人和豬SO的運動具有抑制作用，這種抑制作用是否通過ICC介導(dǎo)尚不清楚。而且，膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK)對SO的作用是否與NO

4、或ICC有關(guān)，是值得深入探討的問題。 因此，本研究采用豚鼠SO石蠟切片的HE染色，冰凍切片的ICC特異性標志物c-Kit蛋白和CCK的特異性抗體的免疫細胞化學(xué)染色及NADPH-d組織化學(xué)染色顯示NO神經(jīng)等方法，從形態(tài)學(xué)角度對豚鼠SO的可能調(diào)控因素進行較詳細的觀察，期望為闡明SO的運動調(diào)控機制提供新的形態(tài)學(xué)依據(jù)。 主要結(jié)果如下： 一、豚鼠與大鼠SO的組織結(jié)構(gòu)比較 HE染色可見：豚鼠SO僅由膽管末端發(fā)達的平滑

5、肌構(gòu)成，未見胰管、共同通道及開口。縱切面可見豚鼠SO分為二個壁：外側(cè)壁和十二指腸內(nèi)壁，前者在結(jié)構(gòu)上類似腸壁，由內(nèi)環(huán)和外縱兩層平滑肌組成，后者由內(nèi)外兩層縱行和中間環(huán)行平滑肌組成，切片上較容易區(qū)分。與豚鼠相比，大鼠膽管末端無SO裝置，所以，本研究主要以豚鼠為研究對象。 二、豚鼠SO內(nèi)ICC樣細胞的分布模式 ICC特異性標記物c-Kit蛋白的單克隆抗體的免疫細胞化學(xué)染色顯示：豚鼠SO縱切面可見外側(cè)壁的深肌叢和肌間神經(jīng)叢周圍存在

6、較多的c-Kit陽性細胞，其形態(tài)特點分別與小腸壁內(nèi)的ICC-DMP和ICC-MY類似，而在十二指腸內(nèi)壁，可見大量c-Kit陽性細胞和突起分布于肌層內(nèi)，以中間的環(huán)肌內(nèi)數(shù)量最多，其形態(tài)特點與小腸的ICC-IM相似。SO橫切面可見環(huán)行平滑肌纖維間散在分布少量的c-Kit陽性細胞，胞體呈長梭形，兩端伸出細長突起，長軸平行于環(huán)行平滑肌，其形態(tài)特征與胃腸壁的ICC-IM非常相似，而在SO與十二指腸移行區(qū)內(nèi)的環(huán)縱肌之間的c-Kit陽性細胞呈橢圓形或三

7、角形，常見三個以上短小突起且有分支，其形態(tài)特征與小腸壁內(nèi)的ICC-MY類似。 三、豚鼠SO內(nèi)NOS陽性神經(jīng)分布模式及其與ICC樣細胞的關(guān)系 1.NADPH-d組織化學(xué)染色可見：在縱切面，NOS陽性神經(jīng)纖維較豐富，廣泛分布于平滑肌層內(nèi)，以肌間神經(jīng)叢最豐富。每個神經(jīng)節(jié)內(nèi)含有數(shù)個～十幾個NOS陽性神經(jīng)元，輪廓較清晰，胞體為圓形，胞漿呈深淺不等的藍色，胞核不著色。在橫切面可見NOS陽性神經(jīng)纖維常呈點狀分布。另外，在十二指腸粘膜和

8、Vater壺腹粘膜的腺細胞間亦存在一些NOS陽性內(nèi)分泌細胞。 2.與免疫細胞化學(xué)雙重染色可見平滑肌層內(nèi)c-Kit陽性細胞的突起常分布在NOS陽性神經(jīng)附近，但未見二者有共存現(xiàn)象。 四、NOS陽性內(nèi)分泌細胞與CCK陽性內(nèi)分泌細胞間的可能關(guān)系 1.NOS陽性內(nèi)分泌細胞的分布規(guī)律：NADPH-d組織化學(xué)染色顯示NOS陽性細胞主要分布于豚鼠的十二指腸乳頭周圍的黏膜小腸腺中下部細胞間或腺泡旁，Vater壺腹黏膜的腺體和黏膜上

9、皮細胞間亦可見一定數(shù)量的NOS陽性細胞，但大鼠胃腸道和膽道的黏膜內(nèi)未見NOS陽性細胞。 2.CCK陽性內(nèi)分泌細胞的分布規(guī)律：應(yīng)用CCK的免疫細胞化學(xué)染色可見，CCK陽性內(nèi)分泌細胞主要分布于十二指腸黏膜腸腺的中下部細胞間，黏膜上皮細胞間亦可見少量CCK陽性細胞。與NADPH-d組織化學(xué)雙重染色結(jié)果表明，CCK陽性細胞與NOS陽性細胞無共存現(xiàn)象，但兩者的分布較近，提示可能存在一定的關(guān)系。 3.應(yīng)用在體和離體實驗探討NOS陽性