龍葵中活性成分的提取、純化及測定研究.pdf

1、本文研究了中藥龍葵(Solanum nigrum L.，S.N.L.)中兩類活性成分一多糖及總生物堿(Total Steriodal A1kaloids，TSA)的提取、純化及測定方法。 (1)確定了多糖和TSA的最優(yōu)提取條件。采用優(yōu)于傳統(tǒng)回流提取的微波輔助提取，以蒸餾水為溶劑，在325W下浸提15min，料液比為1:20，多糖得率達(dá)1.94％；并對提取機(jī)理進(jìn)行了探討。以95％乙醇溶液為溶劑，在455W下浸提8min，料液比

2、為1:20，TSA得率為26.38μg／g；在探究提取機(jī)理的同時，采用薄層色譜法研究了微波作用對TSA結(jié)構(gòu)的影響。 (2)分別探討了多糖、蛋白質(zhì)、澄清度和TSA的測定方法。 采用苯酚一硫酸法結(jié)合DNS法對多糖進(jìn)行測定，確定了最佳檢測條件：總糖含量與吸光度值在18.0～66.0μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；單糖含量與吸光度值在0.40～2.00mg／mL范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。 采用改進(jìn)考馬斯亮藍(lán)法分析測定了多糖中

3、蛋白質(zhì)的含量。線性回歸方程A=-0.0604+0.84543x，R=0.9997。 確定了檢測樣品液澄清度的試驗條件參數(shù)。以440nm處的吸光度和660nm處的透過率為指標(biāo)，分析純化處理前后樣品的澄清狀況。 采用酸性染料比色法對TSA進(jìn)行了測定，TSA含量與吸光度值在3.20～16.0μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 (3)研究了多糖的純化工藝并對最終產(chǎn)品進(jìn)行了初步表征。 采用4000r／min下高速離心1

4、0min去除不溶性雜質(zhì)。 采用天然澄清劑ZTCl+Ⅰ-Ⅱ-NKA-9大孔樹脂聯(lián)用吸附澄清，最佳工藝參數(shù)為：澄清劑兩組份加入順序先B后A；加入量B6％(v／v)，A3％；澄清溫度B80℃，A60℃；提取液處理濃度1:5(g／mL)。樹脂洗脫體積3.2mL(每1mL樣品液)；樹脂用量為干樹脂質(zhì)量：提取液上樣體積=0.4g／mL。此時樣品液在660nm處的透過率從5.40％上升到88.8％，440nm處的吸光度則從2.69下降到0.2

5、58。 研究了采用酶解-Sevag法聯(lián)用去除多糖中的蛋白質(zhì)，確定了最佳清除條件：酶解溫度46℃，酶解時間7.5h，胰蛋白酶用量2％ (v／v)，反應(yīng)pH值6.0，Sevag法萃取七次。試驗結(jié)果表明，殘留蛋白質(zhì)含量僅為0.0940％，清除率高達(dá)99.89％。 采用DE-52和Sephadex G—100為柱填料，通過柱層析進(jìn)一步分離純化龍葵多糖。層析柱尺寸為：16×500mm，試驗裝置簡單，吸附及洗脫易于進(jìn)行。