金黃色葡萄球菌耐藥譜分型、PFGE分型和HVR-PCR分型的比較研究.pdf

1、[目的]了解深圳市人民醫(yī)院金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)的耐藥現(xiàn)狀和醫(yī)院感染狀況，通過耐藥譜分型、脈沖場凝膠電泳(PFGE)分型和mecA基因相關高變區(qū)聚合酶鏈反應(HVR-PCR)分型對金黃色葡萄球菌進行對比分型研究，以尋找一種最佳的分型技術；利用PFGE和HVR-PCR分型技術建立金黃色葡萄球菌電泳圖譜庫，確定菌株之間的相關性及感染流行情況，為減少和控制醫(yī)院感染提供參考。 [方法]1.金黃色

2、葡萄球菌臨床菌株的收集通過回顧性分析，收集深圳市人民醫(yī)院2004年6月～2005年4月期間住院患者經分離鑒定的金黃色葡萄球菌菌株，同一患者前后分離到的相同金黃色葡萄球菌只取首次菌株。 2.耐藥譜分型和醫(yī)院感染分析按照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)2004年標準，應用紙片擴散(K-B)法檢測金黃色葡萄球菌對18種臨床常用抗生素耐藥情況。根據(jù)藥敏結果初步將金黃色葡萄球菌分為甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏

3、感金黃色葡萄球菌(MSSA)，并依據(jù)藥敏結果對MRSA和MSSA作進一步分型；結合病歷確定其是否為醫(yī)院感染菌株，比較MRSA和MSSA在醫(yī)院感染中的流行特征。 3.PFGE分型所有菌株經過溶菌、去蛋白、酶切等處理后，在BIO-RADGenePathTM系統(tǒng)中電泳，經溴化乙啶染色，通過GelDoc2000凝膠成像系統(tǒng)成像，結合FingerprintingⅡ軟件對金黃色葡萄球菌進行基因同源性分型分析，將MRSA和MSSA分型結果與耐

4、藥譜分型結果分別進行對比分析。 4.mecA基因相關高變區(qū)聚合酶鏈反應(HVR-PCR)分型提取金黃色葡萄球菌核酸，設計MRSA中HVR特異性引物，檢測MRSA高變區(qū)片段長度或直接重復單元(DRUs)數(shù)目，依據(jù)DRUs數(shù)目確定其型別。將HVR-PCR分型結果與MRSA的耐藥譜分型結果、PFGE分型結果分別進行比較分析。 [結果]1.51株金黃色葡萄球菌經頭孢西丁藥敏試驗分成23株MSSA和28株MRSA。 2.5

5、1株金黃色葡萄球菌中有16株為社區(qū)感染菌，35株為醫(yī)院感染菌。 3.通過耐藥譜分型將23株MSSA分成11個型，28株MRSA分成7個型。 4.通過PFGE分型將20株MSSA分成16個型，27株MRSA分成12個型，MSSA耐藥譜分型結果和PFGE分型結果并不一致；MRSA耐藥譜分型結果和PFGE分型結果亦不存在一致性。 5.通過HVR-PCR分型將28株MRSA分成10個型，HVR-PCR分型結果和MRSA的

6、耐藥譜分型結果并不一致；但和PFGE分型結果有部分相符。 [結論]1.傳統(tǒng)耐藥譜分型適用于一般醫(yī)療機構，指導臨床用藥。 2.MRSA引起的醫(yī)院感染在金黃色葡萄球菌感染中占主導地位，并存在由同一MRSA菌株引起的醫(yī)院感染流行。 3.PEFG分型方法適用于大量MRSA和所有金黃色葡萄球菌的分型和流行現(xiàn)狀分析。 4.HVR-PCR分型方法分型快速，重復性好，但只適合對院內較少量MRSA菌株進行分型研究。