版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)是規(guī)?;l(fā)現(xiàn)和高通量驗(yàn)證,目前依賴于質(zhì)譜技術(shù)的規(guī)模化發(fā)現(xiàn)技術(shù)已獲得到較快的發(fā)展,但是藉此確定的目標(biāo)蛋白質(zhì)的準(zhǔn)確驗(yàn)證仍然是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的課題?,F(xiàn)有的驗(yàn)證方法主要是基于質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)譜方法(multiple reaction monitoring,MRM)和基于抗體的免疫檢測(cè)方法。MRM方法雖然具有較好的規(guī)?;芰?但是其靈敏度較低,因而其應(yīng)用受到限制,所以免疫檢測(cè)方法仍是目前首選的方法。免疫檢測(cè)方法的靈敏度相
2、對(duì)較高,但是該方法需要依賴昂貴的抗體,且對(duì)于低豐度蛋白質(zhì),其靈敏度仍不能滿足要求,迫切需要新的靈敏度高、價(jià)格低廉的免疫檢測(cè)方法。
針對(duì)以上問題,本研究將納米金(GNP)和氧化石墨烯(GO)引入到目前常用的免疫檢測(cè)方法,即蛋白質(zhì)免疫印跡(western blotting)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中,發(fā)展了新的免疫檢測(cè)方法。其主要原理是基于這兩種納米載體
3、擁有大的比表面積,可以逐級(jí)放大檢測(cè)信號(hào),同時(shí)雙一抗的引入和增大辣根過氧化物酶(HRP)與二抗的比例等,在提高靈敏度的同時(shí),大大降低了成本。
基于以上原理,發(fā)展了新的免疫檢測(cè)方法,包括:基于氧化石墨烯和納米金的信號(hào)雙重放大western blotting新方法和基于氧化石墨烯和納米金的信號(hào)三重放大ELISA新方法。
在基于氧化石墨烯和納米金的信號(hào)雙重放大western blotting新方法的研究中,同時(shí)引入了納米金和
4、氧化石墨烯。首先用納米金與一抗結(jié)合,使得一定量的抗原能夠間接地與更多的一抗相結(jié)合,擴(kuò)大了一抗與抗原的比例。然后用氧化石墨烯與二抗結(jié)合,使得一定量的一抗能夠結(jié)合更多的二抗,增大了二抗與一抗的比例。通過兩次比例的擴(kuò)增,信號(hào)得到逐級(jí)放大,檢測(cè)限被大大降低。而在納米金與一抗結(jié)合過程中,同時(shí)引入兩種一抗(與抗原對(duì)應(yīng)的特異性一抗和輔助一抗),由于輔助一抗在價(jià)格上比特異性一抗更低廉,所以通過該步驟操作,在放大信號(hào)的同時(shí),使昂貴的特異性一抗成本大大降低
5、。western blotting新方法的優(yōu)點(diǎn)是在檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行雙重放大的同時(shí)使得成本大大降低,拓寬了傳統(tǒng)western blotting方法的應(yīng)用范圍,增強(qiáng)了檢測(cè)能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,改進(jìn)后的western blotting和傳統(tǒng)Western blotting方法對(duì)GST蛋白質(zhì)的檢測(cè)限分別為2ngmL-1和64ngmL-1,新方法的檢測(cè)限降低了32倍,成本也大大降低。而且多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法穩(wěn)定性好。
在基于氧化石墨烯
6、和納米金的信號(hào)三重放大ELISA新方法的研究中,分三次先后引入了納米金、氧化石墨烯和納米金。首先將納米金與雙一抗按一定比例結(jié)合,通過此步操作,實(shí)現(xiàn)信號(hào)的第一次放大和成本的第一次降低;其次,通過納米金與二抗和高比例的HRP結(jié)合(此處加入的HRP與二抗的比例是100:1),實(shí)現(xiàn)信號(hào)的第二次放大和成本的第二次降低。最后,將氧化石墨烯與第二步中制備的中間體結(jié)合,擴(kuò)大了二抗與一抗的結(jié)合比例,達(dá)到了再次放大信號(hào)的目的。這種依次將納米金、氧化石墨烯和
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 基于氧化石墨烯的高靈敏度光學(xué)納米生物傳感器研究.pdf
- 化學(xué)還原氧化石墨烯新方法問世
- 基于氧化石墨烯的熒光生物傳感新方法研究.pdf
- 基于質(zhì)譜的疾病標(biāo)記物高靈敏度生物傳感新方法研究.pdf
- 高靈敏度熒光免疫分析方法研究.pdf
- 提高微光信號(hào)檢測(cè)靈敏度的新方法.pdf
- 基于氧化石墨烯的光學(xué)生物傳感新方法研究.pdf
- 基于雜交鏈?zhǔn)椒从撑c氧化石墨高靈敏度檢測(cè)Microrna的熒光傳感器分析.pdf
- 微乳-CE新體系及提高靈敏度的新方法研究.pdf
- 高靈敏度語(yǔ)音檢測(cè)研究.pdf
- 基于磁性還原氧化石墨烯的痕量雙酚A分析新方法研究.pdf
- 基于石墨烯和金屬氧化物納米復(fù)合材料的免疫傳感新方法.pdf
- 高選擇性高靈敏度糖肽富集及質(zhì)譜檢測(cè)新技術(shù)與新方法.pdf
- 基于納米金的農(nóng)藥檢測(cè)新方法.pdf
- 20397.幾個(gè)貴金屬的高靈敏度檢測(cè)方法研究
- 氧化石墨烯固定化酶與固定化受體富集的新方法研究.pdf
- PGE2高靈敏度ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf
- 高靈敏度鉛離子檢測(cè)用納米炭電極的制備.pdf
- 氧化石墨烯和dna納米結(jié)構(gòu)用于核酸檢測(cè)的研究
- 24256.利用sers的兩種高靈敏度固體基底的制備、表征及免疫檢測(cè)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論