宮頸癌細胞系RRM1表達水平與細胞對吉西他濱敏感性的相關(guān)研究.pdf

1、目的: 宮頸癌是危及婦女健康的第二大惡性腫瘤，化療是宮頸癌綜合治療的一種重要手段。吉西他濱(gemcitabine，GEM)是近年來用于宮頸癌治療的新型化療藥物，核糖核苷酸還原酶亞單位M1(ribonucleotide reductase subunit M1，RRM1)是GEM在細胞內(nèi)作用的靶點。本研究通過探討宮頸癌細胞系RRM1表達水平與細胞對GEM敏感性的關(guān)系，并尋求逆轉(zhuǎn)耐藥的方法，以期為指導(dǎo)臨床宮頸癌GEM個體化化療提供理論依據(jù)

2、。 方法: 采用MTT法檢測3種宮頸癌細胞系C33a、Hela、CaSki對GEM、DDP及GEM+DDP的敏感性，RT-PCR、Western Blot檢測各細胞系的RRM1表達水平；對Hela進行GEM誘導(dǎo)耐藥培養(yǎng)，檢測耐藥細胞的耐藥指數(shù)及RRM1表達水平的變化；對CaSki進行RRM1—siRNA轉(zhuǎn)染，檢測轉(zhuǎn)染前后細胞RRM1表達水平及對GEM的敏感性的變化；收集相同濃度DDP不同作用時間及不同濃度DDP相同作用時間下的兩

3、組CaSki細胞，檢測DDP作用后細胞RRM1蛋白表達水平的變化，流式細胞儀檢測DDP、GEM單獨及聯(lián)合用藥下細胞周期的變化及細胞凋亡情況。 結(jié)果: 3種宮頸癌細胞系C33a、Hela、CaSki在GEM作用下72小時的IC50分別為0.58μM、1.43μM、14.39μM，在DDP作用下72小時的IC50分別為3.91μM、3.09μM、3.82μM。C33aRRM1表達水平相對最低，CaSki相對最高，Hela居中。DDP

4、與GEM聯(lián)合作用于CaSki有藥物協(xié)同作用。GEM誘導(dǎo)耐藥培養(yǎng)獲得的Hela耐藥細胞的耐藥指數(shù)為3.6，其RRM1 mRNA及蛋白表達水平均上升。RRM1—siRNA瞬時轉(zhuǎn)染CaSki細胞48小時后檢測細胞RRM1表達水平下降，隨著RRM1—siRNA濃度的增加，RNA干擾效應(yīng)增強，同時CaSki對GEM的敏感性增加。隨著DDP作用濃度的增加及作用時間的延長出現(xiàn)CaSkiRRM1表達的增強。GEM單用或DDP與GEM聯(lián)合作用下均出現(xiàn)細胞

5、S期阻滯，沒有顯著差異(P=0.205)，但聯(lián)合用藥時細胞凋亡增加(P＝0.035)。 結(jié)論: 宮頸癌細胞系對GEM的反應(yīng)存在著異質(zhì)性，宮頸癌細胞系RRM1表達水平與細胞對GEM的敏感性呈負相關(guān)。通過GEM的誘導(dǎo)耐藥，細胞在獲得耐藥的同時RRM1表達增高。細胞RRM1表達增高與GEM繼發(fā)耐藥有關(guān)。RRM1—siRNA干擾可下調(diào)細胞RRM1表達，逆轉(zhuǎn)細胞GEM耐藥。DDP與GEM在體外實驗存在藥物協(xié)同作用，作用機制與RRM1表達無