不同時間窗針刺對宮內(nèi)感染早產(chǎn)腦損傷仔鼠學習記憶及海馬區(qū)NMDAR1表達的影響.pdf

1、　　目的 本實驗采用 Morris 水迷宮實驗及免疫組化方法,觀察針刺“百會穴”、“大椎穴”對宮內(nèi)感染致早產(chǎn)腦損傷仔鼠學習記憶功能的近期、遠期的影響,以及不同時間窗之間的區(qū)別,從細胞、分子生物學水平探討針刺的作用機制,為臨床提供理論基礎及科學依據(jù)。
　　方法 (1)動物模型制備：24只雌性大鼠中有21只受孕,將其隨機分為LPS組(n=18只)、NS組(n=3只)。孕 17天的 LPS組孕鼠予 LPS：350μg/Kg·d腹腔注

2、射,連續(xù)2天,NS組孕鼠予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。孕22天前分娩的仔鼠為早產(chǎn)鼠。(2)動物模型鑒定：隨機選取 LPS 組和 NS 組孕鼠各 1 只取子宮和胎盤行HE染色,觀察宮內(nèi)感染情況。LPS組和NS組0日齡仔鼠各10只斷頭取腦行HE染色,觀察腦組織病理變化。(3)分組：隨機選取 NS組足月仔鼠作為空白對照組(n=25)(A組),LPS組早產(chǎn)仔鼠隨機選取94只,分為模型對照組(n=25)(B組)、早期針刺組(n=23)(C組)、晚

3、期針刺組(n=24)(D組)、撫觸+豐富環(huán)境組(n=22)(E組)。(4)干預方法：A組與B組不行任何干預措施；C組于生后第8天行針刺干預,至第42天；D組于生后第22天行針刺干預,至第42天；E組于生后第2天開始行撫觸干預,至第 14 天,生后第 8 天開始行豐富環(huán)境刺激干預,至第 42 天。(5)仔鼠21日齡時各組隨機選取8只行神經(jīng)行為學檢測。21日齡、42日齡時各組隨機選取 10 只采用 Morris 水迷宮實驗行學習記憶功能測試

4、,免疫組化法行海馬區(qū)NMDA R1表達檢測。
　　結果 (1) 24只雌性大鼠中3只始終未懷孕,LPS組18只孕鼠中,13只提前分娩, 3只分娩前死亡, 2只足月分娩,共娩出早產(chǎn)仔鼠117只,足月仔鼠27只,死產(chǎn)仔鼠51只。NS組孕鼠3只,均足月生產(chǎn),無早產(chǎn)、死產(chǎn),共娩出足月產(chǎn)仔鼠 41只。與 NS 組仔鼠相比, LPS 組仔鼠出生時皮膚顏色紫紺、體重低、活動少、活產(chǎn)量少。(2)HE 染色：LPS 組孕鼠子宮壁及胎盤內(nèi)可見血管

5、充血、水腫,并見大量中性粒細胞浸潤。LPS組仔鼠腦組織出現(xiàn)染色淡、結構疏松等病理變化。(3)21日齡仔鼠：①與空白對照組相比,模型對照組及各干預組 Elp 長、穿臺次數(shù)少、NMDAR1表達低、懸吊試驗分數(shù)低(P<0.01)。②與模型對照組相比,早期針刺組Elp短(P<0.05),穿臺次數(shù)多(P<0.01),撫觸+豐富環(huán)境組Elp短、穿臺次數(shù)多(P<0.05)；各干預組 NMDAR1 表達高、懸吊試驗分數(shù)高(P<0.01)。③與早期針刺組

6、相比,撫觸+豐富環(huán)境組 Elp 長、穿臺次數(shù)少、NMDAR1 表達低、懸吊試驗分數(shù)低(P>0.05)。42日齡仔鼠：①與空白對照組相比,模型對照組、晚期針刺組、撫觸+豐富環(huán)境組 Elp長、穿臺次數(shù)少、NMDAR1表達低(P<0.01)；早期針刺組Elp長(P<0.01)、穿臺次數(shù)少(P<0.05)、NMDAR1表達低(P<0.01)；②與模型對照組比,早期針刺組、撫觸+豐富環(huán)境組 Elp 短,穿臺次數(shù)多(P<0.01),晚期針刺組Elp

7、短(P<0.05),穿臺次數(shù)多(P<0.01),各干預組NMDAR1表達高(P<0.01)。③與早期針刺組比,撫觸+豐富環(huán)境組 Elp 長、穿臺次數(shù)少、NMDAR1 表達低(P>0.05)。④與晚期針刺組相比,早期針刺組Elp短、穿臺次數(shù)多、NMDAR1表達高(P<0.01)；撫觸+豐富環(huán)境組Elp短、穿臺次數(shù)多(P<0.05),NMDAR1表達高(P<0.01)。
　　結論 (1)通過復制黑龍江佳木斯大學宮內(nèi)感染動物模型,證

8、明 LPS 可以造成宮內(nèi)感染并引起仔鼠早產(chǎn)及腦損傷,模型真實可靠。(2)宮內(nèi)感染可以導致仔鼠學習記憶能力降低、神經(jīng)行為學改變、腦組織海馬區(qū) NMDAR1 表達下調(diào),且存在時間長。(3)早期針刺、晚期針刺、撫觸+豐富環(huán)境均可改善仔鼠的學習記憶能力；早期針刺、撫觸+豐富環(huán)境較晚期針刺效果好；早期針刺與撫觸+豐富環(huán)境效果相當；早期針刺、撫觸+豐富環(huán)境近期、遠期均有明顯效果。(4)仔鼠學習記憶功能改善與海馬區(qū) NMDAR1 表達上調(diào)有關。(5)