生長激素在體外對膽管癌、胰腺癌細胞株的增殖及其機制的實驗研究.pdf

1、生長激素(Growth Hormone，GH)是由腦垂體前葉嗜酸性細胞分泌的一種分子量為22000U的單一肽鏈的蛋白質激素。GH的基本生理功能是刺激所有機體組織的發(fā)育，增加體細胞的體積和數(shù)目，它影響幾乎所有的組織類型，包括骨、軟骨、脂肪組織、免疫系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)，各器官在GH的影響下生長變大，骨骼增長導致人體的增高，對腦組織和造血系統(tǒng)也有作用。GH同時也具備其他功能，如對蛋白代謝及機體組織構成具有急性或慢性的效應，調節(jié)體液平衡、碳水化合物

2、及脂類代謝等。蛋白質合成與分解的平衡決定了機體的蛋白平衡。在生理、病理狀態(tài)下這種平衡也可通過一些非激素因素而發(fā)生一系列改變，例如營養(yǎng)狀態(tài)、感染等。 自1989年由瑞士Serono公司研制重組人生長激素(rhGH)成功以來，已廣泛應用于GH缺乏癥的病人，同時研究也證實GH在圍手術期能增進機體免疫、增加蛋白合成及改善營養(yǎng)方面的作用。通過減緩機體蛋白及總體細胞群的丟失，GH的臨床應用已使不少處于負氮平衡的非腫瘤病人度過難關。

3、臨床上，蛋白-營養(yǎng)不良及嚴重的負氮平衡極大的阻礙了腫瘤病人的療效并增加了患者的病死率，此時機體氮平衡的改善顯得更為迫切。但顧慮到GH對腫瘤細胞的促增殖效應，在治療上擴大GH到腫瘤病人的應用仍受到極大的限制，盡管目前對GH潛在刺激腫瘤細胞的作用還存在很大爭議，對于腫瘤個體，研究顯示外源性GH可延緩機體總蛋白及細胞群的丟失，改善營養(yǎng)，增加瘦體重，增強化療效果及降低化療毒性，增進細胞及體液免疫功能，減輕惡病質從而最終使宿主受益。從這個意義上來

4、說，GH可在一定程度上減少腫瘤患者的病死率。但作為有絲分裂原的GH有可能促進組織中的細胞更新而增加了某些細胞的惡性轉化素質，對腫瘤細胞也可能加劇其惡性生物學行為。有鑒于該原因，多數(shù)臨床醫(yī)師仍堅持認為，對GH應用于腫瘤病人這一問題必須相當謹慎。綜合近年來的研究結果，關于GH對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響這一課題，目前仍有許多亟待解決的問題，具體表現(xiàn)在：1)“GH對腫瘤是否具有促增殖作用”這一命題可能因腫瘤病理類型、研究方法、觀察時間的不同而結果各異

5、；2)前瞻性研究仍然缺乏；3)體內外實驗的差異，動物實驗與臨床實驗的差異等；4)在作用機制上仍缺乏系統(tǒng)研究；5)流行病學調查的質量：在病例選擇上，應注意兒童有無腫瘤高危因素，成人有無足夠的隨訪時間，病人是否為同一中心資料以及GH治療的劑量、應用時間、療效的個體差異等偏差。 有鑒于此，我們以膽管癌細胞和胰腺癌細胞作為研究對象作一系列體外研究，觀察外源性GH對兩株癌細胞增殖的影響，并以流式細胞技術觀測GH作用下的細胞周期動力學特征；

6、以安慰劑為對照，對腫瘤細胞分泌的IGF1/2量以ELISA法檢測，同時將細胞爬片、固定后，用原位雜交法檢測IGF1/2RmRNA的表達，首次從蛋白基因的角度，對GH作用于膽、胰癌細胞的可能機制作出初步闡明。具體的研究內容及結果如下： 一、 GH對膽、胰癌細胞株增殖和細胞周期動力學的影響體外培養(yǎng)膽管癌細胞株QBC939和胰腺癌細胞株BXPC-3至指數(shù)生長期，加入不同劑量的GH(終濃度為50ng/ml和100ng/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)2

7、h、24h后分別細胞計數(shù)，觀察細胞生長曲線的變化及生長周期，發(fā)現(xiàn)外源性GH能促進細胞增殖、提高S期細胞百分率及增殖指數(shù)(PI)，但與劑量無顯著關系。 二、GH對腫瘤細胞分泌IGFs的影響及IGFsRmRNA表達的影響體外培養(yǎng)膽管癌細胞株QBC939和胰腺癌細胞株BXPC-3至指數(shù)生長期，加入不同劑量的GH(終濃度為50ng/ml和100ng/ml)，分別繼續(xù)培養(yǎng)2h、24h后吸取其上清液離心，以ELISA法檢測IGFs濃度，同時