外源性細(xì)胞色素C對(duì)膿毒癥小鼠心肌TGF-β1和Smad1-5-8的影響.pdf

1、目的:
　　 探討外源性細(xì)胞色素C(Cytochrome c,Cyt c)對(duì)膿毒血癥性心肌損害、心功能和心肌TGF-β信號(hào)通路的影響。
　　 方法:
　　 雄性昆明小鼠75只,隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham=25)、膿毒血癥組(CLP=25)、細(xì)胞色素C處理組(T=25)。CLP組和T組用盲腸結(jié)扎穿孔法造模,Sham組僅開(kāi)腹翻動(dòng)盲腸。24h造模成功后,T組及Sham組和CLP組分別經(jīng)尾靜脈注射Cyt c(20mg/k

2、g)和150μl生理鹽水,30min后所有動(dòng)物以0、6h、12h時(shí)相點(diǎn)被評(píng)價(jià),每個(gè)時(shí)相點(diǎn)5只小鼠,BL-410多功能監(jiān)護(hù)儀測(cè)左心室收縮壓(Left ventricular systolic pressure,LVSP)、左心室舒張末期壓(Left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左室內(nèi)壓力變化最大上升和下降速率((Maximum rate of left ventricularpres

3、sure development and decay,LV±dp/dt-max)取心肌做組織病理學(xué)檢查、Realtime-PCR Western-Blot檢測(cè)TGF-β1和Smadl/5/8蛋白表達(dá)；24h時(shí)相點(diǎn)留取透射電鏡標(biāo)本,余下的小鼠觀察生存率。
　　 結(jié)果:
　　 1.術(shù)后的一般情況及生存率
　　 3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后2h內(nèi)均蘇醒。Sham組與正常小鼠一般情況無(wú)異,72h全部存活。CLP組小鼠術(shù)后6h開(kāi)始表現(xiàn)

4、出精神萎靡、嗜睡、反應(yīng)遲鈍、活動(dòng)差、怕冷、聚居、豎毛、厭食、眼角分泌物增多、腹瀉等癥狀,24h時(shí)癥狀更加嚴(yán)重。CLP組小鼠,24h和72h存活率分別是78％和44％,符合膿毒血癥動(dòng)物模型標(biāo)準(zhǔn)。T組表現(xiàn)介于前兩者之間,24h和72h存活率分別為89％和67％。
　　 2.病理改變
　　 光鏡HE染色改變:Sham組心肌組織未見(jiàn)明顯病理變化。CLP組可見(jiàn)灶性的心肌纖維斷裂,心肌細(xì)胞可見(jiàn)空胞樣變性,嗜酸樣變性,灶性心肌壞死；T

5、組可見(jiàn)上述改變明顯較輕。
　　 電鏡改變:Sham組肌原纖維可以大量排列整齊的線粒體,線粒體內(nèi)嵴光滑完整。CLP組線粒體明顯增多,排列紊亂,部分線粒體嵴斷裂、溶解,心肌間質(zhì)可見(jiàn)單核細(xì)胞浸潤(rùn)。T組亦局部可見(jiàn)上述改變,但較輕。
　　 3.血流動(dòng)力學(xué)改變
　　 Sham組各時(shí)相點(diǎn)LVSP、LVEDP和LV±dp/dt-max無(wú)明顯變化(P<0.05)。CLP組各時(shí)相點(diǎn)LVSP、LVEDP和LV±dp/dt-max逐漸下

6、降,均低于Sham組(P<0.05)。T組各項(xiàng)指標(biāo)在各時(shí)相點(diǎn)均有所上升,高于CLP組(P<0.05)。
　　 4.TGF-β1、Smadl/5/8蛋白變化
　　 在12h時(shí)相點(diǎn)RT-PCR檢測(cè)各組心肌組織TGF-β1蛋白均有表達(dá),CLP組表達(dá)升高(P<0.05),T組經(jīng)外源性Cyt c干預(yù)后蛋白表達(dá)下降(P<0.05)。Western-Blot檢測(cè)各組心肌組織TGF-β1、Smadl/5/8蛋白均有表達(dá),CLP組表達(dá)明顯