肝素-超氧化物歧化酶結(jié)合物的制備及其防治輻射損傷作用與機(jī)制.pdf

1、近年來研究發(fā)現(xiàn)黏多糖類物質(zhì)肝素(heparin)除具有抗凝血作用外,還能促進(jìn)結(jié)合在內(nèi)皮細(xì)胞(EC)表面的SOD的釋放從而起到抑制氧自由基的作用,另外它在防治肺損傷方面也受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注.因此,我們選擇肝素對SOD進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾以制備肝素-SOD結(jié)合物(HEP-SOD),并研究其生物學(xué)性質(zhì)及對輻射損傷的防治作用.HEP-SOD的制備采用了兩種方法.第一種方法采用12%高碘酸鈉溶液4℃活化肝素20h,活化的肝素溶液與SOD在pH9.5、0.3

2、moL/L碳酸鹽緩沖液中進(jìn)行修飾反應(yīng)12h,經(jīng)DEAE-FF凝膠柱(2.5cm×50cm)層析制備出修飾的SOD,命名為HEP<,IO4><'->-SOD;第二種方法是將氰尿酰氯溶于水與丙酮(1:2)的混合液中使呈飽和溶液,1 0min內(nèi)滴加到肝素溶液中,濃堿調(diào)整保持pH8~9之間進(jìn)行活化反應(yīng),得到的活化肝素溶液與SOD在0.1 mol/L、pH9.2的硼酸鹽緩沖液中進(jìn)行修飾反應(yīng)12h,經(jīng)DEAE-FF凝膠柱(2.5cm×50cm)層析

3、分離出修飾的SOD,命名為HEPcc-SOD.對生物活性測定表明,兩種方法制備的SOD修飾物(HEP<,IO4><'->-SOD和HEP<,CC>-SOD)活性保持率基本相同;用TNBS法測定,兩者自由氨基修飾率相當(dāng);聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳檢測,兩者的電泳圖譜基本一致;穩(wěn)定性試驗(yàn)表明,兩種HEP-SOD的熱穩(wěn)定性明顯優(yōu)于未修飾SOD.酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定兩種HEP-SOD抗原性表明,兩種方法制備的HEP-SOD均基本不能

4、誘發(fā)家兔產(chǎn)生抗其自身的抗體,對誘發(fā)家兔抗SOD抗體的能力均降低為未修飾SOD的1/4.研究了HEP<,IO4><'->-SOD對輻射致DNA損傷的保護(hù)作用.在質(zhì)粒pcDNA3溶液中加入相同活性單位的HEP<,IO4><'->-SOD、SOD和肝素與SOD混合物,用120 Gy的<'60>Coγ射線照射,用瓊脂糖電泳檢測,結(jié)果表明,各用藥組質(zhì)粒DNA的損傷程度均低于未加藥組,其中,HEP<,IO4><'->-SOD組的損傷程度最低,且隨著